Kariotipavimas

Chromosomoms tirti dažniausiai naudojamos trumpalaikės kraujo kultūros, kaulų čiulpų ląstelės ir fibroblastų kultūros. Į laboratoriją pristatytas kraujas su antikoaguliantu centrifuguojamas, kad nusodintų eritrocitus, o leukocitai 2–3 dienas inkubuojami kultūros terpėje. Į kraujo mėginį pridedama fitohemagliutinino, nes jis pagreitina eritrocitų agliutinaciją ir stimuliuoja limfocitų dalijimąsi. Tinkamiausia chromosomų tyrimo fazė yra mitozės metafazė, todėl kolchicinas naudojamas limfocitų dalijimuisi sustabdyti šiame etape. Įdėjus šį vaistą į kultūrą, padidėja ląstelių, esančių metafazėje, t. y. ląstelės ciklo etape, kai chromosomos yra labiausiai matomos, dalis. Kiekviena chromosoma replikuojasi (susidaro savo kopiją) ir po tinkamo dažymo matoma kaip dvi chromatidės, pritvirtintos prie centromeros, arba centrinės susiaurėjimo. Tada ląstelės apdorojamos hipotoniniu natrio chlorido tirpalu, fiksuojamos ir dažomos.

Chromosomoms dažyti dažniausiai naudojami Romanovskio-Giemsos dažai, 2 % acetkarmino arba 2 % acetarseino. Jie chromosomas nudažo visiškai, tolygiai (įprastas metodas) ir gali būti naudojami žmogaus chromosomų skaitinėms anomalijoms aptikti.

Norint gauti išsamų chromosomų struktūros vaizdą, identifikuoti (apibrėžti) atskiras chromosomas ar jų segmentus, naudojami įvairūs diferencinio dažymo metodai. Dažniausiai naudojami metodai yra Giemsa, taip pat G ir Q dažymas. Tiriant preparato mikroskopiją išilgai chromosomos, išryškėja nemažai nudažytų (heterochromatino) ir nedažytų (euchromatino) juostų. Tokiu būdu gautos skersinės dryžuotės pobūdis leidžia identifikuoti kiekvieną chromosomą rinkinyje, nes juostų kaita ir jų dydžiai yra griežtai individualūs ir pastovūs kiekvienai porai.

Atskirų ląstelių metafazinės plokštelės yra nufotografuojamos. Iš nuotraukų iškerpamos atskiros chromosomos ir eilės tvarka klijuojamos ant popieriaus lapo; šis chromosomų vaizdas vadinamas kariotipu.

Papildomo dažymo naudojimas, taip pat nauji chromosomų preparatų gavimo metodai, leidžiantys ištempti chromosomas, žymiai padidina citogenetinės diagnostikos tikslumą.

Žmogaus kariotipui apibūdinti sukurta speciali nomenklatūra. Normalus vyro ir moters kariotipas žymimas atitinkamai 46, XY ir 46, XX. Esant Dauno sindromui, kuriam būdinga papildoma 21 chromosoma (21 trisomija), moters kariotipas apibūdinamas kaip 47, XX 21+, o vyro – 47, XY, 21+. Esant chromosomos struktūrinei anomalijai, būtina nurodyti pakitusią ilgąją arba trumpąją ranką: raidė p žymi trumpąją ranką, q – ilgąją ranką, o t – translokaciją. Taigi, esant 5 chromosomos trumposios rankos ištrynimui (kri-du-šato sindromas), moters kariotipas apibūdinamas kaip 46, XX, 5p-. Vaiko, turinčio translokaciją Dauno sindromą, motina, subalansuotos translokacijos 14/21 nešiotoja, turi 45, XX, t(14q; 21q) kariotipą. Translokacijos chromosoma susidaro susiliejus 14 ir 21 chromosomų ilgosioms rankoms, o trumposios rankos prarandamos.

Kiekviena ranka yra padalinta į regionus, kurie savo ruožtu yra padalinti į segmentus, abu žymimi arabiškais skaitmenimis. Chromosomos centromeras yra atskaitos taškas regionams ir segmentams skaičiuoti.

Taigi, chromosomų topografijai naudojamos keturios etiketės: chromosomos numeris, rankos simbolis, srities numeris ir segmento numeris regione. Pavyzdžiui, įrašas 6p21.3 reiškia, kad kalbame apie 6-osios poros 6-ąją chromosomą, jos trumpąją ranką, 21 sritį, 3 segmentą. Taip pat yra papildomų simbolių, ypač pter – trumposios rankos galas, qter – ilgosios rankos galas.

Citogenetinis tyrimo metodas leidžia aptikti tik maždaug 1 milijono bazių (nukleotidų) dydžio chromosomų delecijas ir kitus pokyčius.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]