Kariotipavimas

Chromosomų tyrinėjimui dažnai naudojamos trumpalaikės kraujo kultūros, taip pat kaulų čiulpų ląstelės ir fibroblastų kultūros. Kraujas, tiekiamas laboratorijai antikoaguliantu, centrifuguojamas raudonųjų kraujo kūnelių nusėdimui, o leukocitai kultūrų terpėje 2-3 dienas inkubuojami. Fitohemagliutininas yra pridėtas prie kraujo mėginio, nes jis pagreitina eritrocitų agliutinaciją ir stimuliuoja limfocitų suskaidymą. Tinkamiausias chromosomų tyrimo etapas yra mitozės metafazė, todėl kolchicinas šiuo etapu sustabdo limfocitų suskaidymą. Pridedant šį vaistą į kultūrą, ląstelių, kurios yra metafazėje, ty toje ląstelės ciklų stadijoje, padidėjimas, kai geriausiai matomos chromosomos. Kiekviena chromosoma pakartoja (gamina savo kopiją) ir po atitinkamos spalvos matoma dviem chromatidais, pritvirtintomis prie centromerio arba centrinės susiaurėjimo. Po to ląstelės apdorojamos hipotoniniu natrio chlorido tirpalu, fiksuotos ir dažomos.

Dažant chromosomas dažniau naudojamas Romanovskio-Giemso dažiklis, 2% acetaminominas arba 2% acetazarinas. Jos visiškai ir vienodai traukia chromosomas (įprastas būdas) ir gali būti naudojamos žmogaus chromosomų skaitmeninėms anomalijoms nustatyti.

Norint gauti išsamų vaizdą apie chromosomų struktūrą, atskirų chromosomų ar jų segmentų identifikavimą (nustatymą), naudojami įvairūs diferencialinio dažymo metodai. Dažniausiai naudojami metodai yra Giemsa, taip pat G- ir Q-lenkimas. Mikroskopinis vaisto tyrimas palei chromosomos ilgį atskleidžia daugybę dažytų (heterochromatino) ir dažytų (euchromatino) juostų. Šiuo atveju gaunamas skersinio juostos pobūdis leidžia identifikuoti kiekvieną chromosomą rinkinyje, nes juostų pakitimai ir jų dydžiai kiekvienai pusei yra griežtai individualūs ir pastovūs.

Fotografuojamos atskirų ląstelių metafazinės plokštelės. Individualios chromosomos išpjauti iš nuotraukų ir įklijuoti ant popieriaus lapo; toks chromosomų paveikslas vadinamas kariotipu.

Papildomo dažymo naudojimas, taip pat nauji chromosomų preparatų gavimo būdai, leidžiantys ištempti chromosomas ilgiu, žymiai padidina citogenetinės diagnostikos tikslumą.

Sukurta speciali nomenklatūra žmogaus kariotipo apibūdinimui. Įprastas kariotipas vyrams ir moterims yra atitinkamai 46, XY ir 46, XX. Į Dauno sindromą, kuriam būdingas papildomas 21 chromosomas (trisomija 21), moterų kariotipas yra 47, XX 21 ir 47 vyrai, XY, 21+. Esant chromosomos struktūrinei anomalijai, reikia nurodyti pakeistą ilgą ar trumpą ranką: raidė p reiškia trumpą ranką, q ilgą ranką ir t - perkėlimą. Taigi, kai ištrinama trumpoji chromosomos 5 sindromas ("kačių šūksnio" sindromas), moters kariotype yra apibūdinama kaip 46, XX, 5p-. Vaiko motina su translokacija Dauno sindromas - subalansuoto 14/21 perkėlimo nešiklis yra 45, XX, t (14q; 21q) kariotipas. Translokacijos chromosoma susidaro, kai ilgosios chromosomos 14 ir 21 apjuosios rankos, o trumpi pečiai prarandami.

Kiekvienas pečius yra padalintas į rajonus, o jie savo ruožtu - į segmentus, o tie ir kiti nurodomi arabiški skaitmenys. Chromosomos centromeris yra atskaitos taškas regionams ir segmentams skaičiuoti.

Taigi, keturi žymekliai naudojami chromosomų topografijai: chromosomų skaičius, pečių simbolis, rajono numeris ir segmento numeris tam tikrame regione. Pavyzdžiui, 6p21.3 įrašas reiškia, kad mes kalbame apie 6 chromosomų pora, savo trumpą rankos, 21 zona, segmente 3. Yra daugiau pasirinktiniai simbolių, ypač pter - į trumpą rankos pabaigoje qter - ilgo rankos pabaigoje.

Citogenezinio tyrimo metodas leidžia aptikti delecijas ir kitus chromosomų pokyčius tik maždaug 1 milijono bazių (nukleotidų) dydžiu.

[1], [2], [3], [4]