Medicinos ekspertas
Naujos publikacijos
PGR kaip genetinių ligų diagnozavimo metodas
Paskutinį kartą peržiūrėta: 23.04.2024
Visas „iLive“ turinys yra peržiūrėtas medicinoje arba tikrinamas, kad būtų užtikrintas kuo didesnis faktinis tikslumas.
Mes turime griežtas įsigijimo gaires ir susiejamos tik su geros reputacijos žiniasklaidos svetainėmis, akademinių tyrimų institucijomis ir, jei įmanoma, medicininiu požiūriu peržiūrimais tyrimais. Atkreipkite dėmesį, kad skliausteliuose ([1], [2] ir tt) esantys numeriai yra paspaudžiami nuorodos į šias studijas.
Jei manote, kad bet koks mūsų turinys yra netikslus, pasenęs arba kitaip abejotinas, pasirinkite jį ir paspauskite Ctrl + Enter.
PGR yra naujas pasiekimas molekulinės genetikos srityje, naudojamas DNR amplifikavimui, ir leidžia konkrečią DNR dalį (ty bet kokį interesų geną) greitai in vitro kartoti daugiau kaip 200 000 kartų. Norėdami atlikti reakciją, pakanka turėti vienos ląstelės DNR medžiagą; PGR amplifikuotas DNR kiekis yra toks didelis, kad ši DNR gali būti tiesiog dažoma (naudojant radioaktyviuosius zondus po elektroforezės nereikia). Būtinas PGR vykdymas yra žinomos amplitudinės DNR srities nukleotidų seka, skirta tinkamai parinkti dirbtinai sintetines pradmenis.
Šiuo metu, PGR yra procesas, vykstantis į vieną vamzdį ir susidedantis iš pasikartojančių pagausinimo ciklų (reprodukcijai, kopija) konkrečios DNR sekų, siekiant gauti pakankamai didelį kopijų skaičių, kad gali būti nustatytas naudojant elektroforezę. Vienas pagrindinis komponentas reakcijos - "pradmenys" - sintetiniai oligonukleotidai, sudarytos iš 20-30 bazių papildančių "Svetainės" (plotus) atkaitinimo (prijungimo) į identifikuojančia dalį šablono DNR.
PCR automatiškai pereina į programuojamą termostatą - termociklerį (termociklerį). Trijų pakopų ciklas, dėl kurio gaunamos tikslios formos DNR identifikuojamos dalies kopijos, yra kartojamos 30-50 kartų pagal nustatytą termociklerio programą. Pirmajame cikle oligoprameriai hibridizuojasi su originalia šablonine DNR, o vėliau (vėlesniuose cikliuose) ir su naujai sintetinėmis DNR molekulėmis, kai jie kaupiasi reakcijos mišinyje. Pastaruoju atveju DNR sintezė nesibaigia dėl temperatūros režimo pasikeitimo, tačiau pasiekus amplifikuotos srities DNR polimerazės ribas, tai lemia naujai sintetinto DNR srities dydį viename nukleotide.
Kaip gautų DNR molekulių aptikimo metodą, naudojamas elektroforezė, pagal kurią amplifikuota medžiaga padalinta pagal amplikonų dydį (amplifikacijos produktai).
PGR pagalba galima tiesiogiai ištirti įtariamų mutacijų ar polimorfinių vietų lokalizavimo vietas, taip pat ištirti kitų specifinių DNR ypatybių buvimą.
[