Medicinos ekspertas
Naujos publikacijos
PGR kaip genetinių ligų diagnostikos metodas
Paskutinį kartą peržiūrėta: 04.07.2025
Visas „iLive“ turinys yra peržiūrėtas medicinoje arba tikrinamas, kad būtų užtikrintas kuo didesnis faktinis tikslumas.
Mes turime griežtas įsigijimo gaires ir susiejamos tik su geros reputacijos žiniasklaidos svetainėmis, akademinių tyrimų institucijomis ir, jei įmanoma, medicininiu požiūriu peržiūrimais tyrimais. Atkreipkite dėmesį, kad skliausteliuose ([1], [2] ir tt) esantys numeriai yra paspaudžiami nuorodos į šias studijas.
Jei manote, kad bet koks mūsų turinys yra netikslus, pasenęs arba kitaip abejotinas, pasirinkite jį ir paspauskite Ctrl + Enter.
PGR yra naujas molekulinės genetikos pasiekimas, naudojamas DNR amplifikacijai ir leidžiantis greitai in vitro padauginti konkretų DNR regioną (t. y. bet kurį dominantį geną) daugiau nei 200 000 kartų. Reakcijai atlikti pakanka DNR medžiagos iš vienos ląstelės; PGR amplifikuotos DNR kiekis yra toks didelis, kad šią DNR galima tiesiog nudažyti (radioaktyviųjų zondų naudoti po elektroforezės nereikia). Būtina PGR atlikimo sąlyga yra žinojimas apie amplifikuoto DNR regiono nukleotidų seką, kad būtų galima teisingai parinkti dirbtinai susintetintus pradmenis.
Šiuo metu PGR yra vieno mėgintuvėlio procesas, susidedantis iš pakartotinių specifinės DNR molekulės sekos amplifikacijos (dauginimo, kopijavimo) ciklų, siekiant gauti pakankamai didelį kopijų skaičių, kurį galima identifikuoti elektroforezės būdu. Vienas iš pagrindinių reakcijos komponentų yra „pradmenys“ – sintetiniai oligonukleotidai, sudaryti iš 20–30 bazių, komplementarių atkaitinimo (prisijungimo) „vietoms“ (sritims) prie identifikuotos matricos DNR srities.
PGR vyksta automatiškai programuojamame termostate – terminiame cikleryje (stiprikliuje). Trijų etapų ciklas, kurio metu gaunamos tikslios identifikuotos matricos DNR dalies kopijos, kartojamas 30–50 kartų pagal nurodytą terminio ciklerio programą. Pirmojo ciklo metu oligoprimerai hibridizuojasi su pradine matricos DNR, o vėliau (vėlesniuose cikluose) su naujai susintetintomis DNR molekulėmis, joms kaupiantis reakcijos mišinyje. Pastaruoju atveju DNR sintezė baigiasi ne dėl temperatūros pokyčio, o pasiekus amplifikuotos dalies DNR polimerazės ribą, kuri nustato naujai susintetintos DNR dalies dydį vieno nukleotido tikslumu.
Elektroforezė naudojama kaip gautų DNR molekulių aptikimo metodas, kurios pagalba amplifikuota medžiaga atskiriama pagal amplikonų (amplifikacijos produktų) dydį.
PGR gali būti naudojama tiesiogiai ištirti įtariamų mutacijų ar polimorfinių vietų vietas, taip pat tirti bet kokių kitų specifinių DNR ypatybių buvimą.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]