Triušio maišelio hematopoetinės kamieninės ląstelės

Akivaizdu, kad įvairių proliferacijos ir diferenciacijos kraujodaros kamieninių ląstelių potencijos, nes jų ontogenetycznego plėtros ypatumus, nes į ontogenezės žmogaus kaita net iš pagrindinių sričių kraujodaros lokalizavimo procesą. Hematopoetiškos progenorių ląstelės iš vaisiaus trynio kiaušinio yra linkusios formuoti tik eritropoetinę ląstelių liniją. Po pirminės GSK migracijos į kepenų ir blužnies mikroorganizmą šių organų paplitimo linijų spektras plečiasi. Konkrečiai, hematopoetinės kamieninės ląstelės įgauna sugebėjimą generuoti limfų linijas. Prenataliniu laikotarpiu hematopoetinės prekursorių ląstelės pasiekia galutinės lokalizacijos zoną ir kolonizuoja kaulų čiulpai. Vaisiaus kraujo vaisiaus vystymosi procese yra daugybė kraujo gimdos kaklelio ląstelių. Pvz., 13-osios nėštumo savaitės HSC lygis siekia 18% viso mononuklearinių kraujo ląstelių skaičiaus. Ateityje jų kiekis palaipsniui mažės, tačiau net iki gimdymo HSC kiekis virkštelės kraujyje labai skiriasi nuo jų skaičiaus kaulų čiulpuose.

Pasak klasikinės idėjos, natūralus pokytis kraujodaros lokalizavimo metu embriono vystymosi žinduolių atlieka migracijos ir įgyvendinti naujus mikroaplinka pliuripotencinių kraujodaros kamieninių ląstelių - nuo trynio maišeliu į kepenų, blužnies ir kaulų čiulpuose. Nuo ankstyvosiose stadijose embriono vystymosi kraujodaros audinių yra daug kamieninių ląstelių, kurios mažėja nėštumo, perspektyviausia gauti kraujodaros kamieninių ląstelių laikomas kraujodaros vaisiaus kepenų audinio izoliuotas nuo abortnogo medžiagos ne 5-8 savaičių nėštumo.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Gimdos kaklelio kamieninių ląstelių kilmė

Neabejotinas faktas, kad embrioninis eritrocitų susidarymas kilęs iš trynų maišelio kraujo salose. Tačiau, in vitro diferenciacija potencialas kraujodaros x trynio ląstelių yra labai ribota (jie daugiausiai diferencijuoti eritrocitai). Reikėtų pažymėti, kad kraujodaros kamieninių ląstelių trynio maišeliu transplantacija negali atkurti kraujodaros ilgą laiką. Paaiškėjo, kad šios ląstelės yra ne suaugusiųjų organizmo GSK pirmtakai. Tiesa GSK atsiranda anksčiau, bent 3-5 savaites vaisiaus vystymuisi, atsižvelgiant į formavimo skrandžio audinio ir endotelio kraujagyslių (paraaortic splanchnopleura P-SP) zonoje, ir vietoj žymes aortos lytinės liaukos ir pirminės inkstų - lauke ar taip mesonephros vadinamas AGM plotas. Įrodyta, kad ląstelės AGM-regionas yra ne tik SSK šaltinis, bet endotelio ląstelės, kraujas ir osteoklastai, procesai, susiję kaulų formavimuisi. Dėl 6-ojo nėštumo savaitės pradžioje kraujodaros kamieninių ląstelių iš AGM-rajono kelionių į kepenis, kuris yra pagrindinis kraujodarą veikiantys vaisiaus iki gimimo.

Kadangi ši vieta yra labai svarbi kalbant apie ląstelių transplantacijos, iš iš HSCs kilmės metu embriono žmogaus problema nusipelno išsamesnio pristatymą. Klasikinis idėja, kad kraujodaros kamieninių ląstelių žinduolių ir gautų iš adnekso šaltinio paukščių, remiantis mokslinių tyrimų METCALF ir Moore, kuris buvo pirmą kartą panaudotas klonavimo technologijų GSK ir jų palikuonių, izoliuota nuo trynio maišeliu. Jų darbo rezultatai suformavo migracijos teorijos pagrindą, pagal kurį GSK, pirmiausia atsirado trynio maišeliu, nuosekliai užima trumpalaikis ir galutines hematopoetinės organus formavimosi procese jų atitinkamoje mikroaplinka. Ir todėl jis sukūrė požiūrį, kad GSK kartos pradžių lokalizuojasi trynio maišeliu, yra korinio pagrindas galutinai kraujodaros.

Kraujodaros kamieninių ląstelių trynio maišeliu yra tarp labiausiai pradžioje kraujodaros kamieninių ląstelių. Jų fenotipas aprašė AA4.1 + CD34 + c-KIT +. Skirtingai HSCs subrendęs kaulų čiulpų, jie neturi išreikšti SCA-1 antigenų ir MHC molekulės. Atrodo, kad žymenų antigenų, išvaizda ant paviršiaus membranų GSK trynio maišelio kultivuojant atitinka jų diferenciacijos metu embriono vystymasis su formavimo padarytus linijų hemopoezei: sumažina ekspresijos lygį CD34 antigeno ir Thy-1 padidina išraiška CD38 ir CD45RA, rodomas HLA-DR molekules. Paskesndse sukeltas citokinų ir augimo faktorių, in vitro išraiškos specializacijos prasideda specifinius kraujodaros kamieninių ląstelių konkretaus ląstelių linijos antigenus. Tačiau iš embriono kraujodaros studijų atstovai tris klases stuburinių (varliagyvių, paukščių ir žinduolių) rezultatai ir visų pirma, iš HSCs kilmės analizė yra atsakinga už galutinį kraujodaros į postnataliniam ontogenezės, priešingai klasikinių idėjų. Buvo nustatyta, kad visų minėtų klasių embriogenezės atstovai suformavo du nepriklausomus sritis, kuriose kyla GSK. Extraembryonic "klasikiniu" regionas, atstovaujama trynio arba jo analogų, o neseniai identifikuojamos intraembrionalnaya HSC lokalizavimo zonoje apima para-aortos mezenchima ir AGM-plotą. Šiandien galima teigti, kad varliagyviai ir paukščiai galutinės HSCs gautos iš intraembrionalnyh šaltinių, o žinduolių ir žmogaus GSK dalis trynio maišeliu į galutinį kraujodaros vis dar neįmanoma visiškai pašalinti.

Embriono kraujodaros trynio maišeliu iš esmės yra pirminis eritropoezę, kuri yra būdinga išsaugojimo branduolio visais eritrocitų brendimui ir tipo vaisiaus hemoglobino sintezės etapais. Remiantis naujausiais duomenimis, pirminės eritropoezės banga pasibaigia trynio maišelyje 8-osios embrioninės raidos dienos. Jis po to kaupimo galutinis eritroidinėse kamieninių ląstelių laikotarpį - BFU-E, kurios susidaro tik trynio maišeliu ir pirmą kartą pasirodė 9-ojo dieną nėštumo. Kitas embriogenezės etapas jau sudaro galutines eritroidines progenitorines ląsteles - CFU-E, taip pat (!) Mast-ląsteles ir CFU-GM. Jis remiasi šiuo požiūriu, kad galutiniai kamieninių ląstelių kilti trynio maišeliu, migruoja per kraują, kaupti kepenyse ir greitai pradėti pirmąjį etapą intraembrionalnogo kraujodaros egzistavimą. Pasak tokių atstovybių, trynys SAC gali būti laikoma, kad, viena vertus, kaip pirminės eritropoezę vietoje, o kitas - kaip pirmojo šaltinio galutinių kraujodaros blastas embriono vystymuisi.

Parodyta, kad koloniją sudarančių ląstelių su dideliu proliferacijos potencialas gali būti izoliuotas nuo trynio maišelyje yra jau 8-osios dienos nėštumo, ty gerokai prieš kraujagyslių sistemos embrionų ir trynio maišeliu uždarymo. Be to kilęs iš trynio maišelio su aukštos proliferacinio in vitro kolonijas formuojančių ląstelių, dydis ir korinio kompozicija, kuri nesiskiria nuo atitinkamų parametrų kultūros augimo kaulų čiulpų kamieninių ląstelių. Tuo pačiu metu, su kolonija, pakartotinė trynio maišeliu ląstelių su dideliu proliferacijos potencialo susiformavo žymiai daugiau koloniją sudarančių ląstelių ir dukra multipotent kamieninės ląstelės, nei su kaulų čiulpų kraujodaros kamieninių ląstelių.

Galutinė išvada apie kraujodaros kamieninių ląstelių vaidmenį trynio maišelio galutinai kraujodaros gali duoti rezultatų, kurie autoriai gautų iš endotelio ląstelių trynio maišeliu (G166), kuris efektyviai palaikė jo ląstelių proliferaciją su fenotipo ir funkcinių charakteristikų HSC (AA4.1 + WGA + liniją, mažas tankis ir silpnos lipnios savybės). Pastarasis kiekis auginant C166 ląstelių tiekimo sluoksnį per 8 dienas padidėjo daugiau nei 100 kartų. Auginami ant S166 ląstelių linijos pasluoksnio mišrios kolonijos buvo nustatyta makrofaguose, granulocitų, megakariocitai, monocitų, ir sprogimo ląsteles ir blastas B ir T limfocitų. Trynio maišelio ląstelės, augančios ant endotelio ląstelių posluoksnio turi galimybę daugintis pats ir vyks į autorių eksperimentų tris ištraukas. Atkūrimo per juos kraujodaros suaugusiųjų pelių su sunkia kombinuotas imunodeficitas (SCID) lydi visų leukocitų rūšių formavimosi, taip pat T ir B limfocitų. Tačiau jų tyrimų autoriai, naudojant ląsteles trynio maišeliu 10 dienų embriono, iš kurio extra- ir intraembrionalnye kraujagyslių sistema jau uždarytos, kad neatmeta tarp ląstelių trynio maišelio GSK intraembrionalnogo kilmės buvimą.

Tuo pačiu metu, analizė diferenciacijos potencialą kraujodaros ląstelių ankstyvuosiuose vystymosi etapuose, iki derinant pasirinktą kraujagyslių sistemą embriono ir trynio maišelį (8-8.5 dienas nėštumo) atskleidė pirmtakų T ir B ląstelių buvimą trynio maišeliu, bet ne embriono kūno . In vitro metodas dviejų pakopų kultūros auginimo sistemos nuo epitelinių ląstelių ir poepitelinį čiobrialiaukės vienbranduolių ląstelių monosluoksnio diferencijuoti į trynio maišelio išankstinio-T ir brandus T-limfocitų. Tomis pačiomis kultūros sąlygomis, bet iš stromos ląstelių, kepenų ir kaulų čiulpų vienabranduolėse ląstelių trynio maišeliu monosluoksnio buvo diferencijuojami atsižvelgiant į iš anksto B ląstelių ir brandžių IglVT-B-limfocitų.

Šių tyrimų rezultatai rodo, kad plėtojant ląstelių imuninę sistemą nuo extraembryonic trynio maišelio audinio, pirminės T ir B ląstelių linijų priklauso nuo veiksnių, kraujodaros stromos mikroaplinkos embriono organų susidarymo galimybę.

Kiti autoriai taip pat rodo, kad trynio ląstelės su potencijomis apima limfinio diferenciaciją, ir suformuota limfocitai nesiskiria nuo tų antigeninių savybių subrendusių gyvūnų. Jis nustatė, kad ląstelės trynio maišelį 8-9 dienų embriono gali atkurti užkrūčio limfopoezės į atimotsitarnom su brandaus CD3 + CD4 + atsiradimo - ir CD8 + SDZ + limfocitų turinčio papuoštas repertuarą T ląstelių receptorių. Taigi, užkrūčio liauka gali būti apgyvendintas ląstelių adnekso kilmę, bet tai neįmanoma išskirti iš migracijos galimybę Užkrūčio liauka kamieninių ląstelių T limfocitų iš intraembrionalnyh limfopoezės šaltinių.

Tačiau transplantacija iš trynio maišeliu kraujodaros ląstelių į apšvitinto suaugusiųjų gavėjams ne visada baigti populiacijos atkūrimo ilgai nuniokojo zonos kraujodaros audinių lokalizacija, in vitro ląstelių trynio maišeliu formuoti blužnies kolonijas daug mažesnis negu ląstelės AGM-srityje. Kai kuriais atvejais, naudojant trynio maišelio ląstelės 9 dienų embriono dar galima pasiekti ilgalaikį (iki 6 mėnesių) populiacija atsinaujina iš kraujodaros audinių apšvitinti gavėjams. Autoriai mano, kad trynio maišelio fenotipas CD34 + c-KIT + pagal jų sugebėjimą repopulate suniokotus kraujodarą veikiantys elementai, ne tik nesiskiria nuo tos AGM-regione, bet taip pat efektyviau atkurti kraujodaros, kaip trynio maišeliu juose beveik 37 kartus daugiau .

Reikėtų pažymėti, kad eksperimentuose, kraujodaros ląstelės trynio maišeliu su žymenų antigenų GSK (c-KIT + ir / arba CD34 + ir CD38 +), kuris buvo įvestas tiesiai į kepenis ar pilvo venų palikuonių pelių patelėms gaunančių injekcijų busulfanui iki 18 nėštumo dienos. Be šių naujagimių gyvūnų savo mielopoezę buvo smarkiai prislėgtas dėl kraujodaros kamieninių ląstelių, kurias sukelia busulfanui panaikinimo. Po transplantacijos, HSCs iš trynio maišeliu už mėnesių, ir į periferinį kraują gavėjų identifikuojamos eritrocitus, kurių sudėtyje yra donorų žymeklį - glitserofasfatdegidrogenazu. Ji yra nustatyta, kad trynio maišeliu iš GSK sumažintas turinį limfoidinės ląstelės, mieloidinių ir eritroidinėse linijų kraujo, užkrūčio liaukos, ir kaulų čiulpuose, kur chimerismo lygis buvo didesnis intrahepatitinių, o ne į veną trynio ląstelių atveju. Autoriai rodo, kad HSCs nuo trynio maišeliu embrionų ankstyvuosiuose vystymosi etapuose (iki 10 dienų) už sėkmingą atsiskaitymą iš kraujodaros organų suaugusių gavėjams, kuriems reikia priimti prejudicinį bendradarbiaujant su kraujodaros mikroaplinkos kepenyse. Tai įmanoma, kad embriogenezės yra unikalus plėtros etapas, kai iš trynio maišelio ląstelės, migruojantys kepenyse, tada įgyja gebėjimas kolonizuoti stromos formavimo organus suaugusių gavėjams.

Šiuo atžvilgiu reikėtų pažymėti, kad ląstelių imuninės sistemos Chimerizmo dažnai būna po transplantacijos kaulų čiulpų ląstelių į apšvitinti gavėjų lytiškai subrendusių - į kraujo ląstelių donoro pastaruosius fenotipų į pakankamai dideliais kiekiais randama tarp B ir T-limfocitų ir granuliocitų gavėją, kuris trunka bent 6 mėnesiai.

Morfologiniai būdai hematopoetinės ląstelių žinduolių pirmasis aptiktas dėl 7-osios dienos embriono vystymosi ir pristato hematopoetinės salose, kaip apibrėžta trynio maišeliu laivams. Tačiau, natūralus kraujodaros diferenciacija trynio maišeliu yra ribotas pirminiai eritrocitai išsaugant šerdį ir sudarančias sintezės vaisiaus hemoglobino. Tačiau tradiciškai buvo manoma, kad trynys SAC yra vienintelis šaltinis SSK migruoja į kraujodaros organų besivystančiam vaisiui ir pateikti galutinį kraujodaros suaugusių gyvūnų, nes SSK išvaizda embriono kūno yra kraujagyslių sistema embrionui ir trynio maišeliu uždarymas. Remiant Šiuo požiūriu, atsižvelgiant į duomenis, kad in vitro po klonavimo ląstelėse trynio kilti granuliocitų makrofagų ir, in vivo - blužnies kolonijų. Tada per transplantacijos eksperimentus buvo nustatyta, kad kraujodaros ląstelės trynio maišeliu, kuris, trynio maišelis gali atskirti tik į pirminių raudonųjų kraujo kūnelių atsižvelgiant į naujagimio ir suaugusiųjų SCID-pelių kepenų mikroaplinkos nuniokojo užkrūčio arba stromos tiektuvas įgyja gebėjimą repopulate kraujodaros organus su restauravimo visi kraujagyslių linijos net suaugusiems gyvūnams. Iš esmės, tai gali būti priskirta juos į tikrąjį GSK kategorijos - kaip ląstelių funkcionavimui ir pogimdyminiu laikotarpiu. Manoma, kad trynys SAC, kartu su AGM regione, iš HSCs šaltinis galutinai kraujodaros žinduolių, tačiau vis dar neaišku, iš jų indėlį į kraujodaros sistemą. Aš nesuprantu, biologinę reikšmę ir egzistavimą pradžioje embriogenezės žinduolių, du kraujodaros organų, turinčių panašias funkcijas.

Atsakymų į šiuos klausimus paieška ir toliau. In vivo nepavyko įrodyti trynio maišeliu embrionų 8-8,5 dienos mobilųjį limfopoezės buvimą mažinant sublethally Apšvitintam SCID-peles su sunkia trūkumas T ir B limfocitų. Triušių maišelio kraujo kūneliai buvo švirkščiami tiek intraperitoniškai, tiek tiesiai į blužnies ir kepenų audinius. Po 16 savaičių, gavėjai nustatė TCR / CD34 \ CD4 + ir CD8 + T limfocitų ir B-220 + IgM + B ląsteles paženklinti antrhgenami donoras MHC. Autoriai nerado kūno, kamieninių ląstelių embrionų, kurie gali atkurti imuninę sistemą, 8-8,5 dienos.

Trynio hematopoetinių ląstelių turi aukšto proliferacinis potencialą ir yra pajėgi ilgalaikio savireprodukcijos in vitro. Kai kurie autoriai nustatė šias ląsteles, kaip už ilgalaikio SSK (apie 7 mėnesius) nuo eritocitinių kamieninių ląstelių skiriasi nuo kaulų čiulpų kamieninių ląstelių eritroidinių linija persėjant ilgiau, didelių matmenų kolonijas kartos pagrindu, padidėjęs jautrumas augimo faktoriais ir ilgesniu platinimu. Be to, pagal atitinkamas kultivavimą trynio ląstelių in vitro sąlygomis yra suformuotas ir kamieninių ląstelių, limfoidinio audinio serijos.

Šie duomenys rodo, kad bendrąją šaltinį trynio maišelio GSK, kuriame mažiau atsidavusių ir todėl turi didelį dauginimosi potencialą negu kaulų čiulpų kamieninių ląstelių. Tačiau, nepaisant to, kad trynys SAC kuriame pliuripotencinių hematopoetinės kamieninės ląstelės, ilgalaikis patvirtinamuosius įvairių linijų kraujodaros diferenciacijos in vitro, vienintelis kriterijus GCW naudingumą yra jų sugebėjimas repopulate pailginto hematopoetinės organus gavėjui, hematopoetinės ląsteles, kurios yra genetiškai trūksta arba sugadintas. Taigi, pagrindinis klausimas yra tai, ar daugiapotencinės kraujodaros ląstelės trynio maišeliu migruoti ir kolonizuoti hematopoetinės organus ir tselesoorbrazno būti peržiūrėta garsiąją darbą, kuris įrodė savo sugebėjimą repopulate kraujo formavimo organai lytiškai subrendusių gyvūnų su pagrindinių kraujodaros linijų formavimas. Embrionais paukščių, 70-ųjų, buvo nustatyta intraembrionalnye šaltinių galutinis SAK, kad jau buvo suabejota nustatytas sąvokas apie adnekso GSK kilmės produktuose, įskaitant atstovais kitų klasių stuburinių. Per pastaruosius kelerius metus buvo publikacijos apie žinduolių buvimą ir žmonės panašūs intraembrionalnyh svetainių, kurių sudėtyje yra GSK.

Dar kartą atkreipiame dėmesį, kad pagrindinis žinių šioje srityje yra labai svarbūs praktiškai ląstelių transplantacijos, nes ne tik padės nustatyti pageidaujamą šaltinį SSK, tačiau taip pat nustatyti sąveikos pirminių kraujodaros ląstelių iš genetiškai užsienio organizmų ypatybes. Yra žinoma, kad vartojant žmogaus hematopoetinių kamieninių ląstelių vaisiaus avių kepenų organogenezės embriono stadijoje veda prie gamybos chimerinių gyvūnų, kraujo ir kaulų čiulpų stabiliai nustatyto nuo 3 iki 5% žmogaus hematopoetinių ląstelių. Šiuo atveju žmogaus HSCs nekeičia savo kariotipo, išlaikant aukštą lygį platinimu ir gebėjimas atskirti. Be to, transplantuotas ksenogeninės SSK neprieštarauja imuninės sistemos ir fagocitines ląstelių šeimininko organizmą ir transformuojama į naviko ląstelių, kad formavusios intensyvios plėtros metodų pagrindą intrauteriniam korekcijos paveldimos genetinės ligos, naudojant ESCS arba HSCs transfekuotos trūkumą genai.

Bet kokioje embriogenezės stadijoje yra tikslingiau atlikti tokią pataisą? Ląstelės pirmą kartą, kaip nustatyta, kraujodaros žinduolių atsiranda iš karto po implantavimo (nėštumo 6 dieną), kai morfologinės charakteristikos kraujodaros diferenciacijos ir žarninių kraujodaros organų dar nėra. Šiame etape, Išskirstytųjų pelės embriono ląstelės gali repopulate hematopoetinę organų apšvitinti, bet gavėjų, kad sudarytų eritrocitai ir limfocitų, skiriasi nuo šeimininko ląsteles, arba hemoglobino tipo atitinkamai glitserofosfatizomerazy ir papildomą chromosomų žymeklį (TB) apie donoro ląstelių. Žinduolių, pavyzdžiui, paukščių, kartu su trynio maišeliu prie bendro kraujagyslių lova uždarymo tiesiai į į para-aortos splanhnoplevre embriono kūno atrodo hematopoetinės ląsteles. Iš AGM-paskirstytų zonos hematopoetinių ląstelių AA4.1 + fenotipo, kaip nustatyta, Multipotent kraujodaros ląstelių, sudarančiomis T ir B-limfocitų, granulocitų, megakariocitai, ir makrofagus. Fenotipą, šie multipotent kamieninių ląstelių yra labai arti kaulų čiulpų HSCs suaugusių gyvūnų (CD34 + C-Kit +). Iš multipotent AA4.1 + ląstelių tarp visų AGM-ląstelių srityje, skaičius yra nedidelis - jie ne daugiau kaip 1/12 dalis.

Žmogaus embrionoje taip pat buvo nustatyta homologinė gyvūnų AGM regionas, turintis intraembryinį regioną, turinčią HSC. Be to, žmogaus organizme embrionui yra daugiau kaip 80% dauginotencinių ląstelių, turinčių didelį proliferacinį potencialą, nors tokios ląstelės yra triušių maišelyje. Išsami jų lokalizacijos analizė parodė, kad šimtai tokių ląstelių surenkamos į kompaktiškas grupes, kurios yra arti šalia endosofono dorsalinės aortos ventralinės sienelės endotelio. Fenotipiškai jie yra CD34CD45 + Lino ląstelės. Priešingai, tokiuose ląstelėse yra viengubo embriono (kepenų, kaulų čiulpų) kraujo kūnelių, triušių maišelyje.

Todėl, žmogaus embriono AGM-regionas yra grupes kraujodaros ląstelių, kurios yra glaudžiai susijusios su pilvo dorsalinės aortos endotelio. Šis kontaktas gali būti atsekti ir imunocheminio lygis - ir grupes kraujodaros ląstelių ir endotelio ląstelių, ekspresuojančių kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus, Flt-3 ligandą ir jų receptorius FLK-1 ir STK-1, taip pat transkripcijos faktorius leukemija kamienines ląsteles. AGM-vietovės mezenchiminių darinių, pavaizduotų tankius tyazhem suapvalinta ląsteles, esančių palei nugaros aortos ir išreikšti tenascino C - glikoproteino pagrindinę medžiaga yra aktyviai dalyvaujant su ląstele sąveikos ir migracijos procesus.

Multipotent kamieninės ląstelės AGM-rajono po transplantacijos greitai atkurti kraujodaros suaugusių pelių ir veikiami ilgai (iki 8 mėnesių) teikti veiksmingą kraujodaros. Tokių savybių ląstelių maišelyje autoriai neatskleidė. Šio tyrimo rezultatai patvirtina kitų darbų, kurie parodė, kad ankstyvuosiuose vystymosi etapuose embrionų (10,5 dienų) AGM regione yra vienintelis šaltinis ląstelėse, atitinkančias GCW, mieloidinių ir limfinę atkurti kraujodaros suaugusiųjų apibrėžimą apšvitinti gavėjus.

Nuo AGM-skiriama plotas stromos linijos AGM-S3, kuri remti ląstelių kartos kultūros KSV-GM įvykdytų protėvių, BFU-E, KSV-E ir KSV mišraus tipo. Jo auginimo metu AGM-S3 ląstelių pašarų padėklas padidėja nuo 10 iki 80 kartų. Todėl, atsižvelgiant į AGM-regiono dabartinių stromos ląstelėse mikroaplinkos, efektyviai remti kraują, todėl jis AGM-zona gali gerai tarnauti embrionines kraujodaros organus - galutinius šaltinis SSK, kad yra GSK formavimo kraujodaros audinius suaugusio gyvūno.

Pažangiosios immunofenotipirovanie korinio kompozicija AGM-regionas parodė, kad ji gyvena ne tik Multipotent hematopoetinės ląstelės, bet taip pat ląsteles iš įsipareigojusi mieloidinės ir limfoidinių (T ir B limfocitų) diferenciaciją. Tačiau, kai molekulinė analizė individualios CD34 + c-kit + ląstelių iš AGM-regione naudojant polimerazės grandinės reakcija buvo nustatyta aktyvinti tik beta-globino ir myeloperoxidase bet ne limfoidinės genus, koduojančius CD34 sintezę, Thy-1 ir 15. Dalinės aktyvavimo Lineage konkrečius genus tipiškas už ankstyvieji ontogenetiniai HSC ir progenitorių ląstelių generavimo etapai. Atsižvelgiant į tai, kad šis skaičius kommiti- Rowan protėviai AGM-Plotas 10 dienų embriono 2-3 eilėmis mažesnis nei kepenų, tai galima teigti, kad ne iš embriono kraujodaros į AGM 10 dieną dar tik prasideda, o daugiausia hematopoetinės linijos jau yra panaudotos per šį laikotarpį.

Iš tiesų, priešingai nei anksčiau (9-11 dienų) ir kraujodaros kamieninių ląstelių trynio maišeliu ir iš AGM, kuris pakartotinos populiacijos kraujodaros mikroaplinka naujagimio srityje, tačiau ne suaugęs, kraujodaros kamieninių ląstelių 12-17 dienų vaisiaus kepenų nereikalauja Ankstyvi pogimdyminiai mikroaplinka ir kraujodaros organai užima suaugęs gyvūnas yra ne blogiau nei naujagimio. HSCs po transplantacijos vaisiaus kepenų suaugusiųjų kraujodaros į apšvitintų gaunančių pelių buvo polikloninis pobūdžio. Be to, naudojant paženklinti kolonijų yra įrodyta, kad nustatytų klonų operacija buvo visiškai paklūsta klonų paveldėjimo, aptikta suaugusiųjų kaulų čiulpuose. Todėl GSK vaisiaus kepenų pažymėta kaip daug švelnus sąlygas be prestimulyatsii egzogeninių citokinų, jau pagrindinius atributus suaugusiųjų HSCs nereikalingas pradžioje po embriono mikroaplinka, į giliai poilsio būklę po transplantacijos ir mobilizavo klonoobrazovanie nuosekliai laikantis modelio klonų eilės.

Akivaizdu, kad turėtume šiek tiek išsamiau aptarti klonų paveldėjimo fenomeną. Eritropeizėje yra gimdos kaklelio kraujo ląstelės, turinčios didelį proliferacinį potencialą ir gebėjimą diferencijuoti visose veikliosiose prekursorių kraujo ląstelėse. Normalaus kraujodaros intensyvumo dauguma kraujodaros kamieninių ląstelių metu yra ramybės būseną ir panaudojama susijusioje su padidinta platinimo ir diferenciacijos paeiliui einančias formavimo klonai. Šis procesas vadinamas klonų palikuonimis. Eksperimentiniai įrodymai apie klonų perorientavimą kraujodaros sistemoje buvo gauti atlikus GSK tyrimus su retrovirusinio geno pernešimu. Suaugusių gyvūnų hematopozezę palaiko daugelis tuo pačiu metu veikiančių kraujo kūnelių klonų, gautų iš GSK. Remiantis klonų paveldėjimo fenomenu, buvo sukurtas GCS identifikavimo metodas. Pagal šį principą, atskirti ilgalaikę HSCs (ilgalaikis kamieninių kraujodaros ląstelių, LT-SSK), sugeba atkurti kraujodaros sistemą mokymosi visą gyvenimą, ir trumpalaikio SSK, atlikti šią funkciją ribotą laiką.

Jei mes manome, kraujodaros kamienines ląsteles požiūriu repopulyatsionnogo požiūris, būdingas kraujodaros vaisiaus kepenų ląstelių yra jų sugebėjimas sukurti koloniją, kuri savo dydžiu yra daug didesnis nei tie, su GSK virkštelės kraujo arba kaulų čiulpų padidėjo, ir tai galioja visiems kolonijų tipai. Šis faktas rodo, didesnę proliferacinė pajėgumą kraujodaros vaisiaus kepenų ląstelių. Unikalios kraujodaros kamieninių ląstelių vaisiaus kepenų - trumpesnis, kai, palyginti su kitų šaltinių ląstelės cikle, kuris yra svarbus nuo efektyvumo populiacijos atkūrimas kraujodaros transplantacijai požiūriu. Analizė korinio ryšio sudėties kraujodaros suspensijos, gautos iš šaltinių brandaus organizmo, rodo, kad visuose ontogenezy iš branduolį ląstelių etapais naudingai atstovaujama, terminiu būdu, diferencijuotos ląstelės, skaičių ir fenotipą iš kurių priklausys nuo donoro kraujodaros ontogenetycznego audinio amžiaus. Visų pirma, iš Monobranduolio kaulų čiulpų ir bambagyslės kraujo ląstelių suspensija daugiau nei 50% susideda iš subrendusių limfoidinės ląstelės, kadangi mažiau nei 10% limfocitų aptinkama vaisiaus kepenų hemopoetinio audinio. Be to, mieloidinių linija ląstelės vaisiaus kepenų ir vaisiaus eritroidai naudingai pateikti kitą, o smegenų kraujo ir kaulų čiulpų granuliocitų-makrofagų vyrauja elementus.

Svarbu tai, kad embrioninėse kepenyse yra pilnas ankstyviausių hemoglobino pirmtakų rinkinys. Pastarosios yra eritroidinės, granulopoetinės, megakaripoidinės ir daugianacionalinės kolonijas sudarančios ląstelės. Jų daugiau primityvieji protėviais - LTC-IC - sugeba daugintis ir diferencijuoti in vitro 5 ar daugiau savaičių, o taip pat po prigijimą į gavėjo įstaiga alogeninių išlaikyti funkcinį aktyvumą, ir net ksenogeniniais transplantacija į imuninės gyvūnų.

Biologinis galimybių vyrauja vaisiaus eritocitinių kepenų ląstelių (iki 90% visų kraujodaros ląstelių) dėl poreikio teikti eritrocitų masę sparčiai didėja kraujo tūrį besivystančio vaisiaus. Vaisiaus kepenų eritropoeze branduolinių eritroidai pirmtakai, atstovaujama skiriasi vienas nuo kito brandos, kurių sudėtyje yra vaisiaus hemoglobino (a2u7), kuri yra dėl didesnio deguonies trauka užtikrina veiksmingai panaudojamos pastaroji nuo motinos kraujo. Sustiprinimas eritropoeze vaisiaus kepenų yra susijęs su vietos padidėjimo sintezės eritropoetino (EPO). Pažymėtina, kad kraujodaros potencialo kraujodaros vaisiaus kepenų ląstelių pakankamai vien buvimas eritropoetinu įgyvendinimas, o Lineage įsipareigojimu eritropoezę kaulų čiulpų HSCs ir virkštelės kraujo reikalauja citokinų ir augimo faktorių, susidedančių iš EPT, SCF, GM-CSF ir IL-3 derinys. Šiuo pradiniu kraujodaros kamieninių ląstelių, išskirtų iš vaisiaus kepenų be receptorių EPO, nereaguoja į egzogeninį eritropoetinas. Indukcijai eritropoeze keliose vaisiaus kepenų ląstelių suspensijos vienabranduolėse reikalauja daugiau pažangiosios eritropoetinchuvstvitelnyh ląstelių fenotipo su CD34 + CD38 +, kurios ekspresuoja EPO receptorių buvimas.

Literatūroje dar nėra bendro sutarimo dėl hemopoieso susidarymo embrioniniame laikotarpyje. Nenustatytas egzistavimą ir funkcinę reikšmę extra- ir intraembrionalnyh šaltinių kraujodaros kamieninių ląstelių. Tačiau nėra jokių abejonių, kad embriogenezės žmogaus kepenys yra centrinis organas kraujodaros ir 6-12 nėštumo savaičių yra pagrindinis šaltinis kraujodaros kamieninių ląstelių, kurios užpildyti blužnis, užkrūčio liauka ir kaulų čiulpų, VDR pasiekti panašių funkcijas prieš ir po gimdymo laikotarpiais plėtra.

Reikėtų dar kartą pažymėti, kad embrioninės kepenys, palyginti su kitais šaltiniais, būdingos didžiausiam HSC kiekiui. Maždaug 30% embrioninių kepenų CD344 ląstelių turi CD38 fenotipą. Tuo pačiu metu limfinių progenitorių ląstelių (CD45 +) kiekis ankstyvose hematopoezės stadijose kepenyse yra ne daugiau kaip 4%. Nustatyta, kad nuo 7 iki 17 nėštumo savaitės nuo 7 iki 17 nėštumo savaitės B limfocitų skaičius palaipsniui didėja 1,1% per mėnesį, o GSC lygis nuolat mažėja.

Funkcinis kraujo kūnelių ląstelių aktyvumas taip pat priklauso nuo jų šaltinio embriono vystymosi laikotarpio. Tyrimas kepenų ląstelių kolonijas sudarančių veiklos žmogaus embrionų 6-8 minutes ir 9-12 minučių-osios nėštumo savaitės, kai kultivuojamos pusiau kieto terpėje SCF, GM-CSF, IL-3, IL-6 ir EPO buvimo parodė, kad bendras skaičius kolonijų 1 , 5 kartus didesnis, sėjant HSV embrionines kepenis anksti. Tuo pačiu metu, kepenų kamieninių ląstelių skaičius mielopoezę kaip KSV-GEMM, bent 6-8 savaites embriogenezės yra daugiau nei tris kartus per 9-12 nėštumo savaičių skaičių. Apskritai, kepenų kraujodaros kolonijas sudarančių veiklą pirmojo trimestro nėštumo embriono ląstelių buvo gerokai didesnis nei vaisiaus kepenų ląstelėse antrąjį nėštumo trimestrą.

Minėti duomenys rodo, kad vaisiaus kepenų ankstyvą embriogenezės pasižymi ne tik didelis kiekis pradžioje kraujodaros kamieninių ląstelių, tačiau jo kraujodaros ląstelės pasižymi plataus spektro diferenciacijos į įvairių ląstelių linijų. Šie funkcinio aktyvumo kamieninių kraujodaros vaisiaus kepenų ląstelių savybės gali būti šiek tiek klinikinės reikšmės, nes jų kokybiniai charakteristikos leidžia tikimasi, gydomąjį poveikį, kai ji išreiškiama transplantacijos net nedidelį kiekį ląstelių, gautų ne ankstyvosiose stadijose nėštumo.

Nepaisant to, problemos, susijusios su hematopoetinių kamieninių ląstelių skaičiumi, reikalingomis veiksmingai transplantacijai, lieka atviros ir aktualios. Vykdo bandymus jį išspręsti panaudojant didelį embrioninių kepenų hematopoetinių ląstelių savaiminio atkūrimo potenciją in vitro, stimuliuojant citokinų ir augimo faktorių. Su nuolatine embrioninių kepenų ankstyvojo GSC bioreaktoriaus perfuzija, po 2-3 dienų produkcijos metu galima gauti kamieninių kraujo ląstelių skaičių, kuris yra 15 kartų didesnis už jų pradinį lygį. Palyginimui, reikėtų pažymėti, kad norint 20 kartų padidinti HSC nugaros kraują tokiomis pačiomis sąlygomis, tai trunka mažiausiai dvi savaites.

Taigi, embrioninė kepenys skiriasi nuo kitų hematopoetinių kamieninių ląstelių šaltinių, kuriuose yra didesnė tiek įvykdytų, tiek ankstyvų hematopoetinių progenitorių ląstelių dalis. Kultūra su vaisiaus kepenų ląstelių augimo faktoriais su fenotipas CD34 + CD45Ra1 CD71l0W forma 30 kartus daugiau kolonijų nei panašūs virkštelės kraujo ląstelių ir 90 kartus daugiau nei kaulų čiulpų HSCs. Labiausiai ryškus šių skirtumų išankstinio kraujodaros kamieninių ląstelių, sudarančių mišrias kolonijų kiekio šaltinių - iš KSV-GEMM skaičius vaisiaus kepenyse viršija kad virkštelės kraujo ir kaulų čiulpų, atitinkamai 60 ir 250 kartų.

Svarbu yra tai, kad iki 18 savaitės embriono vystymasis (per kraujodaros kaulų čiulpų pradžioje) į hemopoetinio funkcijos įgyvendinimą apima daugiau nei 60% kepenų ląsteles. Nuo prieš 13 savaitės vaisiaus vystymuisi žmonėms nebūna užkrūčio liauka ir timocitų atitinkamai transplantacija kraujodaros vaisiaus kepenų ląstelėse 6-12 nėštumo savaičių žymiai sumažina reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" riziką ir nereikalauja iš histocompatible donorų atranka, nes ji leidžia gana lengva pasiekti hemopoetinis chimerizmas.