Medicinos ekspertas
Naujos publikacijos
Restruktūrizacijos fragmentų ilgio polimorfizmo analizė
Paskutinį kartą peržiūrėta: 18.10.2021
Visas „iLive“ turinys yra peržiūrėtas medicinoje arba tikrinamas, kad būtų užtikrintas kuo didesnis faktinis tikslumas.
Mes turime griežtas įsigijimo gaires ir susiejamos tik su geros reputacijos žiniasklaidos svetainėmis, akademinių tyrimų institucijomis ir, jei įmanoma, medicininiu požiūriu peržiūrimais tyrimais. Atkreipkite dėmesį, kad skliausteliuose ([1], [2] ir tt) esantys numeriai yra paspaudžiami nuorodos į šias studijas.
Jei manote, kad bet koks mūsų turinys yra netikslus, pasenęs arba kitaip abejotinas, pasirinkite jį ir paspauskite Ctrl + Enter.
Platus įvairių restrikcijos endonukleazių naudojimas chromosomų DNR analizei parodė didelį žmogaus genomo kintamumą. Netgi nedideli struktūrinių genų kodavimo ir reguliavimo sričių pokyčiai gali sukelti tam tikro baltymo sintezės nutraukimą arba jo funkcijos praradimą žmogaus kūne, kuris paprastai daro įtaką paciento fenotipui. Tačiau maždaug 90% žmogaus genomo susideda iš nekoduojančių sekų, kurios yra labiau kintančios ir kuriose yra daug vadinamųjų neutralių mutacijų ar polimorfizmų, ir neturi fenotipinės išraiškos. Tokios polimorfinės vietos (lokusai) yra naudojamos paveldimų ligų diagnozei kaip genetiniai žymekliai. Polimorfiniai lokiai yra visose chromosomosose ir yra susieti su konkrečiu geno regionu. Nustačius polimorfinio lokuso lokalizaciją, galima nustatyti, su kuria genoma susijusi mutacija, kuri sukėlė ligą pacientui.
Siekiant išskirti polimorfinius DNR regionus, naudojami bakterijų fermentai - restrikcijos fermentai, kurių produktas yra restrikcijos vietos. Spontaninės mutacijos, atsirandančios polimorfinėse vietose, daro jas atsparus arba, atvirkščiai, jautrūs specifinio restrikcijos fermento veikimui.
Restruktūrizavimo svetainių mutacinis kintamumas gali būti nustatomas keičiant ribotų DNR fragmentų ilgį, atskiriant juos elektroforeze ir po to hibridizuojant specifines DNR zondus. Jei polimorfinėje aikštelėje nėra apribojimų, elektroforegramose bus nustatytas vienas didelis fragmentas, o jei yra, bus mažesnis fragmentas. Restruktūrizavimo svetainės buvimas ar nebuvimas tose pačiose homologinės chromosomų lokėse leidžia patikimai žymėti mutantinį ir įprastą geną ir atsekti jo perdavimą palikuonims. Taigi, tiriant pacientų DNR abiejose chromosomose, kurių polimorfiniame regione yra restrikcijos vieta, elektroforegramoje bus aptikti trys DNR fragmentai. Pacientams, homozigotiniams dėl mutacijos, kuri pakeičia polimorfinę restrikcijos vietą, bus nustatyti didesnio ilgio fragmentai, o heterozigotinėse fragmentuose bus nustatyti trumpi ir ilgi fragmentai.
[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12]