Medicinos ekspertas
Naujos publikacijos
Restrikcijos fragmentų ilgio polimorfizmo analizė
Paskutinį kartą peržiūrėta: 05.07.2025
Visas „iLive“ turinys yra peržiūrėtas medicinoje arba tikrinamas, kad būtų užtikrintas kuo didesnis faktinis tikslumas.
Mes turime griežtas įsigijimo gaires ir susiejamos tik su geros reputacijos žiniasklaidos svetainėmis, akademinių tyrimų institucijomis ir, jei įmanoma, medicininiu požiūriu peržiūrimais tyrimais. Atkreipkite dėmesį, kad skliausteliuose ([1], [2] ir tt) esantys numeriai yra paspaudžiami nuorodos į šias studijas.
Jei manote, kad bet koks mūsų turinys yra netikslus, pasenęs arba kitaip abejotinas, pasirinkite jį ir paspauskite Ctrl + Enter.
Plačiai paplitęs įvairių restrikcijos endonukleazių naudojimas chromosomų DNR analizei atskleidė milžinišką žmogaus genomo kintamumą. Net ir nedideli struktūrinių genų koduojančių ir reguliuojančių sričių pokyčiai gali lemti tam tikro baltymo sintezės nutraukimą arba jo funkcijos praradimą žmogaus organizme, o tai dažniausiai paveikia paciento fenotipą. Tačiau maždaug 90 % žmogaus genomo sudaro nekoduojančios sekos, kurios yra kintamesnės ir turi daug vadinamųjų neutralių mutacijų arba polimorfizmų, ir neturi fenotipinės raiškos. Tokie polimorfiniai regionai (lokusai) naudojami diagnozuojant paveldimas ligas kaip genetiniai žymenys. Polimorfiniai lokusai yra visose chromosomose ir yra susiję su konkrečiu geno regionu. Nustačius polimorfinio lokuso lokalizaciją, galima nustatyti, kuris genas yra susijęs su mutacija, sukėlusia paciento ligą.
Polimorfinėms DNR sritims išskirti naudojami bakterijų fermentai – restriktazės, kurių produktas yra restrikcijos vietos. Spontaninės mutacijos, atsirandančios polimorfinėse vietose, padaro jas atsparias arba, atvirkščiai, jautrias specifinės restriktazės veikimui.
Mutacinį kintamumą restrikcijos vietose galima nustatyti keičiant DNR restrikcijos fragmentų ilgį, atskiriant juos elektroforezės būdu ir vėliau hibridizuojant specifiniais DNR zondais. Nesant restrikcijos polimorfinėje vietoje, elektroforegramose bus aptiktas vienas didelis fragmentas, o jam esant – mažesnis fragmentas. Restrikcijos vietos buvimas arba nebuvimas identiškuose homologiškų chromosomų lokusuose leidžia gana patikimai žymėti mutantinį ir normalų geną ir sekti jo perdavimą palikuonims. Taigi, tiriant pacientų DNR abiejose chromosomose, kurių restrikcijos vieta yra polimorfinėje srityje, elektroforegramoje bus aptikti trumpi DNR fragmentai. Pacientams, homozigotiniams mutacijai, kuri keičia polimorfinę restrikcijos vietą, bus aptikti ilgesni fragmentai, o heterozigotiniams pacientams – trumpi ir ilgi fragmentai.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]