Herpeso diagnostika

Diagnozė herpes yra grindžiamas klasikinis virusinės praliejimo elgesio jautrus ląstelių kultūrų, imr.rnofluorescencija ir serologinių metodų, vykdant colposcopic studijas naudojant šiuolaikines molekulinės biologijos metodais (PGR, DOT-hibridizacija), kuri leidžia diagnozuoti visą herpes grupę, įskaitant HHV-6 ir HHV-7 tipai.

Herpeso infekcijos laboratorinės diagnostikos metodai

Pagrindiniai metodai, kuriais siekiama išskirti HSV ar nustatyti viruso daleles ir (arba) jų komponentus	Pagalbiniai metodai, skirti nustatyti antikūnus prieš HSV žmogaus organizmo biologiniuose skysčiuose
HSV išskyrimas jautriose ląstelių ir gyvūnų kultūrose Tiesioginė ir imuninė elektroninė mikroskopija Tiesioginės ir netiesioginės MFP galimybės IFA Molekuliniai biologiniai metodai Latekso agliutinacijos reakcija	Neutralizacijos reakcija RSK Antikūnų prieš HSV-1,2 nestruktūrinius baltymus nustatymas

Parodyta, kad 76% pacientų turi genitalijų pūslelinį (GH), kurį sukelia HSV-2, o 24% - HSV-1 tipo. GG kaip monoinfekcija įvyko tik 22% pacientų, 78% atvejų buvo nustatytos mikrobų asociacijos. 46% pacientų nustatyta du parazitocenozė, kurią sukėlė du patogenai, įskaitant 40% atvejų chlamidiją. Dažniau tepiniuose nustatoma gardnerelly, trichomonas, gonokokai.

27% pacientų parazitocenozę parodė trys, o 5% - keturi ligos sukėlėjai. Be to, dažniau pastebėta chlamidijų derinys su Gardnerella ir Candida genties grybais. Šie duomenys pagrindžia kruopščiai bakteriologinio tyrimo pacientų YY nustatyti sukėlėjas derinius poreikį, taip pat išsamų tyrimą dėl mišrių infekcijų urogenitalinės sistemos, kuri leistų diferencijuotai sudėtingos terapijos HSV infekcijos patogenezę.

Medžiagos, kurios turi būti tiriamos, atskyrus HSV, priklausomai nuo herpinių pažeidimų lokalizacijos

Pažeidimų lokalizavimas	Vezikulų turinys	Ląstelių surinkimas				SDC	Aspiracija iš bronchų	Bioptatas	Kraujas
		1	2	3	4
Oda	+								+
Akys			+						+
Genitalija				+					+
Anus	+				+				+
Burnas	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lengvas svoris		+					+		+
Kepenys								+	+
Įgimtas herpesas	+	+	+				+		+

Citomegalovirusinės infekcijos laboratorinės diagnostikos metodai

Metodai	Laikas, reikalingas rezultatams gauti	Pastabos
VIRUSOLOGINĖ
Elektroninė mikroskopija	3 val	Siaubingas
Viruso išskyrimas ląstelių kultūroje (CPD)	4-20 dienų	Standartinis, lėtas
Imunofluorescencinis ankstyvojo AH dažymas su monokloniniais antikūnais	6 val	Mažiau konkretūs
CYTOLOGINĖ	2-3 val	Mažiau konkretūs
SEOLOGINIS
RSK	2 dienos	Standartas
Ssubsistence	1 diena	Laborious
REEF	6 val	Paprasta, specifiška
NFIF	6 val	Sudėtinga
RIMF	6 val	Sudėtinga
IFA (IgM, TO)	6 val	Greitas, paprastas
Imunoblotas	6 val	Brangus
MOLEKULINĖ-BIOLOGINĖ
MG	5-7 dienos	Brangiai kainuojantis, daug laiko
PCR	3 val	Brangus

Herpes zoster viruso diagnozavimo metodai

Diagnostikos metodai	Laboratoriniai metodai
NETIESIOGINIS
Paskirstymas	Audinių kultūra, vištienos embrionai, laboratoriniai gyvūnai, kartu auginami su leistinomis ląstelėmis ar pagalbiniais virusais
Izoliatų identifikavimas	Neutralizacijos reakcija, DSC, IF, IPPE, nuosėdų izoliatų reakcija, agliutinacija, IF
Tiesioginis
Citologija	Tepinėliai: spalvos imunofluorescencija
Histologija	Ląstelės patoforfologija
Struktūra	Embrioninė mikroskopija, imuninė elektroninė mikroskopija
Antigenų nustatymas	IF, PIÉF, RIM, IFA
Vietinės antikūnų gamybos nustatymas	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molekuliniai biologiniai požiūriai	Molekulinė hibridizacija, PGR

Herpes zoster viruso infekcijos laboratorinė diagnostika

Diagnostikos problemos	Metodai	Laukiami rezultatai
Ūminė pirminė infekcija	1	Aptikimas po 2 valandų
	2	Antikūnų lygis auga lėtai
	3	Pateikite 3 dienas po infekcijos
Ūminė pakartotinė infekcija	1	ULV aptikimas per 2 valandas
	2	Antikūnų lygis auga lėtai
	4	Pateikite 4 dienas po bėrimų atsiradimo

1. WIEF pūslelių skysčio nustatymas;
2. serologija: DSC, ELISA, skirta identifikuoti
3. Serologija: ELISA, skirtas IgM aptikimui;
4. serologija: ELISA, skirta IgA, IgM aptikimui.

Infekcijos, atsirandančios dėl herpes zoster viruso, imuninio atsako nustatymo metodai

Požiūris	Metodas
Antrojo serumo padidėjęs antikūnų titras nustatomas	RSK, RTGA, RPGA, neutralizacijos reakcija IF, RIM, ELISA
Pirmame serumo mėginyje IgG, Ig A klasės antikūnų nustatymas	IFA, IF, RIM, latekso agliutinacija

Sergančių pacientų serumų tyrimo rezultatų aiškinimas dėl herpesvirusinių infekcijų (ELISA)

Infekcijos pavadinimas / žymeklis	Vidutinės infekcijų ribos
	Analizės rezultatai	Aiškinimas
Citomgalija Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Teigiamas 1-6 teigiamas 6-10 teigiamas> 10 neigiamas teigiamas 100-300 neigiamas <90 abejotinas 90-100	Perdozavimas Sumažėjimas ligos Ūminis ligos etapas Nėra infekcijos (liga) Ūminis ligos etapas Pakartokite analizę po 2-3 savaičių
Herpes simple 1,2 serotipas Anti-HSV 1/2 iš viso. (100-900%)	Teigiamas 100-400 teigiamas 400-800 teigiamas> 800 neigiamas <100	Išemija Sumažėjusi ligos Ūminis ligos etapas Nėra infekcijos (ligos)

Lentelėje pateikti pagrindiniai herpesvirusinių infekcijų laboratorinės diagnostikos metodai, taip pat rekomenduojamos biologinės medžiagos, kurios tiriamos HSV izoliavimui, atsižvelgiant į herpinių pažeidimų lokalizaciją.

Patikima yra herpes simplex ir CMV paskirstymas jautrių ląstelių kultūrų infekcija. Taigi, atliekant virusinį 26 ligonių recidyvo tyrimą, 23 atvejais (88,4%) HSV buvo išskirtas jautrioje Vero ląstelių kultūroje. Užkrėstose kultūrose pastebėtas HSV būdingo citopatinio pobūdžio veiksmas - daugiapakopių milžiniškų ląstelių susidarymas arba suapvalintų ir išsiplėtusių ląstelių kaupimasis ryšulių forma. 52,1% atvejų buvo įmanoma aptikti viruso citopatinio poveikio kamienus 16-24 valandomis po infekcijos. Iki 48-72 valandų inkubuojant užkrėstų kultūrų, medžiagų, sukeliančių specifinį ląstelių naikinimą, procentas padidėjo iki 87%. Tik 13% atvejų teigiami rezultatai buvo nustatyti praėjus 96 valandoms po infekcijos ir daugiau ar pakartotinai pravažiuojant.

Generalizuotos herptinės infekcijos laboratorinės diagnostikos metodai

Pagrindiniai metodai, skirti herpesvirusų, jų dalelių ir jų komponentų aptikimui (izoliacijai) nustatyti

Pagalbiniai metodai, skirti aptikti antikūnus prieš herpeso virusus biologiniuose skysčiuose, aptikti fermentinius kraujo serumo pokyčius

Izoliacija Herpes viruso imlių ląstelių kultūrų ir gyvūnų Tiesioginis ir imuninės elektronų mikroskopijos Tiesioginis ir netiesioginis imunoperoksidazinis metodo įgyvendinimo variantuose tiesioginių ir netiesioginių fluorescencinių antikūnų technika parinkčių galimybes IFA įgyvendinimo variantuose molekulinės (DNR-DNR), kuris hibridizuojasi polimerazės grandininė reakcija reakcija latekso agliutinacijos

Neutralizacijos reakcija komplemento sujungimo reakcija latekso agliutinacijos Netiesioginis fluorescencinė antikūnas įkūnijimas Netiesioginis imunoperoksidaziniu metodas variantas įsikūnijimai ELISA metodas imuninė sugeriamojo radialinis fiksavimą komplemento metodas nustatymas alanino ir aspartato lygių

Serologiniai metodai naudojami infekcinės mononukleozės (VEB infekcijos) diagnozavimui. Reakcijos Paul-Bunnelya su avių eritrocitų, iš 1:28, diagnostikos ir aukščiau titras tik vienas tyrimas serume, arba 4 kartus antikūnų padidinimą, kai buvo tiriamas suporuotas serumai. Naudokite Goff-Bauer reakciją su 4% formalaus žiurkės kraujo kūnelių suspensija. Rezultatas įvertintas po 2 minučių, o infekcinė mononukleozė yra labai specifiška.

Šiuo metu yra sukurtas fermentinis imuninis tyrimas (ELISA), skirtas diagnozuoti infekcinę mononukleozę. Kai klasių IgG ir IgM antikūnai pacientų serumu yra nustatomas pagal jo inkubacijos su užsikrėtusių EBV po fluorescencinės antikūnų limfoblastais. Ūminio ligos laikotarpiu antikūnai prieš viruso kappido antigeną nustatomi 1: 160 ir didesniame titeryje.

Kai naudojant importuotų komercinių bandymų sistemų IFA numerį, gali nustatyti: antikūnų skruzdžių Egan EBV apvalkalo antikūnų prieš pradžioje antigenu, EBV, bendras antikūnų prieš ankstyvo antigenu, EBV, nustatyto ūmios fazės ligos ir branduolio ir citoplazmoje, ir ribotą antikūno EBV anksti, nustatomas ūmios fazės ligos ir branduolio ir ląstelių citoplazmoje, kuris apibrėžiamas antikūnų EBV pradžioje antigeno, nustatyta remiantis ligos tik ląstelių citoplazmoje viduryje, ir antikūnų EBV branduolinės antigeno. Naudojant šiuos bandymo sistemos leidžia diferencinė diagnostika ligų, susijusių su EBV skaičius.

Po to, kai teigiamas IFA nustatyti antikūnus EBV suteikia immunoblot patvirtinantį sukeltą atsaką, kuris aptinka antikūnų, kad atskirti EBV žymenų proteinus (p-baltymai) buvimą: P23, P54, P72 (iš baltymo buvimą siūlo reprodukcijos EBV galimybę), p 138. Said Aukščiau laboratoriniai metodai yra naudojami gydymo veiksmingumui kontroliuoti.

Virusologinių metodų jautrumas yra 85-100%, specifiškumas yra 100%, studijų laikas yra 2-5 dienos. Praktiškai dažnai naudojamas tiesioginio imunofluorescencijos (PIF) metodas su polikloniniais arba monokloniniais antikūnais prieš HSV-1 ir HSV-2. UIF metodas gali būti lengvai atkuriamas įprastoje klinikinėje laboratorijoje, tai nėra brangus, jautrumas yra didesnis nei 80%, specifiškumas yra 90-95%. Iki imunofluorescencinių mikroskopijos atskleidė citoplazmos intarpai, morfologinių savybių buvimą, iš infekuotų ląstelių į tepinėlius procentais, įbrėžimų šlaplės, gimdos kaklelio kanalą, gimdos kaklelio, tiesiosios žarnos.

UIF metodas suteikia idėjų apie ląstelių morfologines savybes ir HSV antigenų lokalizacijos pokyčius. Be tiesioginių herpeso virusų ląstelių pažeidimo požymių (specifinio liuminescencijos nustatymas), remiantis UIF duomenimis, yra netiesioginių herpeso infekcijos požymių:

• branduolinės medžiagos agregavimas, kariolmos šveitimas;
• buvimas vadinamasis. Branduolių "skylės", kai iš ląstelės branduolio išlieka tik viena kariolema;
• intranuclear inclusions - Caudry veršis.

Nustatant UIF gydytoją gauna ne tik kokybę, bet ir kiekybinis įvertinimas infekuotų ląstelių, kad mes buvo naudojamas įvertinti antivirusinių terapijos efektyvumą su acikloviro (AC). Taigi 80 pacientų, turinčių paprastą genitalijų pūslelinį (GG), buvo tiriami pagal UIF metodą dinamika. Jis parodė, kad, jeigu prieš gydymą acikloviro į tepinėlius 88% pacientų turėjo didelį procentą infekuotų ląstelių (50-75% ir daugiau), po vieną kursą acikloviro į tepinėlius 44% pacientų, kurių sveikų ląstelių aptiktų 31% atvejų yra pažymėtos individualius infekuotų ląstelių ir 25% pacientų turėjo iki 10% infekuotų ląstelių.

Užsikrėtusių ląstelių kiekis tepintuose (PIF reakcija) pacientams, sergantiems genitalijų pūslelinė, gydomi acikloviru

Ligos laikotarpiai	Procentas tepiniuose
	Užkrėstos ląstelės					Normalios ląstelės
	Daugiau nei 75%	50-75%	40-50%	10%	Vienos ląstelės n / sp
Atsinaujina (prieš gydymą)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisija (po gydymo)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Naudojant daugelį metų UIF ir dot-hibridizacijos metodą, beveik 100% atvejų sutampa su tyrimo rezultatais. Reikėtų pažymėti, kad norint padidinti diagnozuoti GH patikimumą, ypač tais atvejais, kai yra slaptasis ir malomanifestnyh formos pūslelinės, rekomenduojama naudoti 2-3 metodą laboratorinės diagnostikos, ypač nagrinėjant nėščioms moterims, su akušerijos istorijos nepalankioje, žmonės su nenustatytą Ginekologinės diagnozę.

Taigi, PGR diagnozuoti virusinių ir bakterinių infekcijų urogenitalinės sistemos būtina įvertinti teigiamus rezultatus, pasiektus su istorija, buvimą (ar nebuvimą) konkrečių klinikinių simptomų. Jei chlamidija nustatoma PCR, tada šiuo atveju galima kalbėti apie infekciją ir atitinkamai išspręsti gydymo problemas. Tuo atveju, nustatant mikoplazmos (ureaplasmas) yra oportunistinių patogenų, siekiant patvirtinti diagnozę reikia atlikti kultūros tolesnius tyrimus, t. E. Augalininkystė medžiaga iš pacientas jautrus ląstelių kultūrose. Tik tada, kai kultūros analizėje bus gauti teigiami rezultatai, galime kalbėti apie laboratorinį mikoplazmozės diagnozės patvirtinimą. Tas pats metodas leis prireikus nustatyti izoliuotų mikoplazmų jautrumą dažnai naudojamoms vaistinėms formoms (antibiotikams, fluorhinolonams ir tt).

Galbūt vienpakopė infekcija su keliais šeimos Nepresviridae virusais. Dažnai nustatėme vieno paciento su HSV-1, HSV-2 ir CMV virusu infekciją. Daug dažniau užsikrėtę su keliais herpes virusais buvo pacientai su klinikiniai ir laboratoriniai apraiškas antrinių CID (oncohematological pacientai, vėžys, ŽIV infekcija). Taigi, parodyta, kad klinikiniai ir imunologiniai sutrikimai, progresuojantys su ŽIV infekcija, kartu didina molekulinės hibridizacijos metu nustatytų herpesvirų skaičių. Šiuo prognostiškai reikšmingiausiu atveju galima laikyti kompleksiniu vienkartiniu HSV-1, CMV ir HHV-6 tipo DNR nustatymu.

[1], [2], [3]