Konfokalinė mikroskopija

Konfokalinė mikroskopija šiuo metu laikoma vienu perspektyviausių odos vaizdinimo in vivo metodų, todėl susidomėjimas ja yra neįprastai didelis tiek tarp klinikų gydytojų, tiek tarp tyrimų institutų atstovų.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Konfokalinės mikroskopijos galimybės

Dermatologijoje konfokalinė lazerinė mikroskopija naudojama šiais atvejais:

• junginių prasiskverbimo į odą tyrimas (prasiskverbimo keliai, kinetika, pasiskirstymas odoje);
• liaukų veikimo stebėjimas (aktyvios ir pasyvios būsenos nustatymas);
• mikrocirkuliacijos lovos tyrimai (įskaitant realiuoju laiku);
• Neoplazmų diagnostika.

Neaptardami minėtų konfokalinės mikroskopijos tipų privalumų ir trūkumų, pastebime, kad pastaraisiais metais vis labiau populiarėja fluorescencinė lazerinė konfokalinė mikroskopija.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokalinė mikroskopija odos tyrimams

Konfokalinis mikroskopas suteikia dvi neįkainojamas galimybes – tirti audinius ląstelių lygmeniu fiziologinės gyvybinės veiklos būsenoje ir demonstruoti tyrimo rezultatus (t. y. ląstelių aktyvumą) keturiais matmenimis – aukštyje, plotyje, gylyje ir laike. Vaizdo kokybei ir tyrimo gyliui svarbiausią vaidmenį atlieka audinio gebėjimas praleisti šviesą, kitaip tariant, jo skaidrumas. Konfokalinės mikroskopijos metodas yra bekontaktis, šviesos spindulys nesukelia jokios žalos ar diskomforto tiriamam pacientui ar eksperimentiniam gyvūnui.

Konfokalinė skenuojanti lazerinė mikroskopija (CSLM) naudojama odai tirti. Šis metodas leidžia pamatyti epidermį ir dermos spenelių sluoksnį su beveik histologinei skiriamąja geba. Visi tyrimo rezultatai rodomi monitoriuje ir išsaugomi kaip vaizdo failų paketas (mikrofilmas (dinamiškai) arba mikrofotografijos).

Yra du metodo tipai:

• atspindintis (atspindžio CSLM) – pagrįstas tuo, kad įvairios tarpląstelinės ir tarpląstelinės struktūros turi skirtingus šviesos lūžio rodiklius, o tai leidžia gauti kontrastinį vaizdą.
• fluorescencija (fluorescencinė CSLM) – naudoja lazerio šviesą, kuri prasiskverbia pro odą ir sužadina joje esančius egzo- arba endochromoforus, kurie reaguodami pradeda skleisti fotonus (t. y. fluorescuoti).

Šoninė skiriamoji geba yra mažiausias atstumas tarp taškų, esančių horizontalioje plokštumoje, t. y. plokštumoje, lygiagrečioje odos paviršiui. Ašinė skiriamoji geba yra mažiausias atstumas tarp taškų, esančių plokštumoje, statmenoje odos paviršiui.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Konfokalinės mikroskopijos istorija

Idėja sukurti mikroskopą, galintį parodyti gyvo audinio pjūvį ląstelių lygmenyje, buvo aktyviai plėtojama prieš 130 metų. Pagrindinis šiuolaikinių mikroskopų elementas buvo sukurtas XIX amžiaus pabaigoje ir buvo besisukantis diskas su mažytėmis skylutėmis, išdėstytomis spirale. Šį diską 1883 m. išrado vokiečių studentas Paulas Nipkowas, kurio vardu jis ir buvo pavadintas – Nipkowo disku. Išradimas buvo pagrįstas šviesos, praeinančios pro mažytes disko skylutes ir didinamąjį lęšį, gebėjimu prasiskverbti giliai į audinį ir apšviesti ląstelės fragmentą, esantį atstumu nuo paviršiaus. Kai diskas greitai sukasi, fragmentai sudaro vieną vaizdą. Perkeliant struktūrą tolyn nuo objekto arba arčiau jo, galima keisti tiriamo audinio optinio pjūvio gylį.

Tik devintajame dešimtmetyje atsiradus vaizdo įrašymo įrenginiams, o dešimtojo dešimtmečio pradžioje – kompiuteriams, galintiems apdoroti vaizdus, tapo įmanoma sukurti ir efektyviai naudoti šiuolaikinius mikroskopus, kurie naudojami šiandien.