Virškinimo trakto kraujo hemopoetinės kamieninės ląstelės

Paprastųjų kraujagyslių kraujas veikia kaip kraujotakos kamieninių ląstelių šaltinis dėl kraujodaros ląstelių proliferacinio potencialo ir repopuliacijos galimybių. Buvo pakartotinai parodyta, kad pristatymo metu nugaros smegenų kraujyje yra pakankamai daug blogai veikiančių hematopoetinių progenitorių ląstelių. Kai kurie autoriai mano, kad nugaros kraujo kraujo kūnelių ląstelių persodinimo pranašumas yra tas, kad nereikia ieškoti donoro, kuris būtų suderinamas su HLA antigenais. Pasak jų, naujagimio imuninė sistema priežasčių nebrandumą sumažėjo funkcinį aktyvumą imuniteto ląsteles ir, atitinkamai, mažesnė nei kaulų čiulpų transplantacijos, sunkaus reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" dažnis. Šiuo ląstelių transplantacijos išlikimo virkštelės kraujo yra ne mažesnis nei kaulų čiulpų ląstelių, net naudojant mažesnį skaičių GSK administruoja už 1 kg paciento svorį. Tačiau, mūsų nuomone, optimalus skaičius klausimus persodinami virkštelės kraujo ląstelės, kurios būtinos efektyviam prigijimą į gavėjo, imunologinio suderinamumo ir kitų aspektų transplantacijos kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės skaičius kraujas reikalauja rimtesnių analizę kūno.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Gauti kraujo kraujo kraujotakos kamienines ląsteles

Už gauti kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės kraujo procedūra karto reikalauja savo suvartojamų po gimimo ir jo atskyrimo nuo placentos, kai placenta yra gimdoje arba ex gimdoje, taip pat Cezario pjūvį, bet ir buvęs gimdoje. Parodyta, kad tuo atveju, kai sumažėja laikas nuo gimimo iki naujagimio atskyrimo nuo placentos iki 30 sekundžių, gauto virkštelės kraujo kiekis vidutiniškai padidėja 25-40 ml. Vėlesnė procedūra praranda tokį patį kraujo kiekį. Nustatyta, kad ankstyvas vaiko atskyrimas nuo užpakalio negavo jokios neigiamos pasekmės naujagimiui.

Rusijos tyrimų institutas Hematologijos ir Kraujo perpylimo sukūrė veiksmingą ir nebrangų technologijos tiek virkštelės kraujo ne fiziologinių linijų ((70,2 + 25,8) ml) ir cezario pjūvio ((73,4 + 25,1) ml). Būdas atskyrimo bambagyslės kraujo su pakankamai didele išeiga vienbranduoliniq ląstelių ir branduolį - (83,1 + 9,6) ir (83.4 + 14.1)%, atitinkamai. Pagerino metodas kriokonservavimas iš smegenų kraujo, kuris užtikrina aukštą saugumą vienbranduoliniq ląstelių ir KSV-GM - (96,8 + 5,7) ir (89.6 + 22,6)%, atitinkamai. Iš drenažo virkštelės kraujo mėginių ėmimo metodą, naudojant pakuotę "Kompoplast-300" (Rusija) efektyvumas. Tvora laidas kraujo autoriai atliekama iš karto po gimimo ir jos atskyrimo nuo placentos, kalbant apie pateikimo į gimdoje arba ex gimdoje placentą. Prieš pradurto bambos venų bambagyslės vieną kartą gydomi 5% jodo tinktūra, ir po to du kartus - 70% etilo alkoholio. Kraujas, tekėjęs per jungiamuosius vamzdelius, į konteinerį spontaniškai. Tvoros trukmė truko ne ilgiau kaip 10 minučių. 66 surinkti drenažo tūris metodas bambos kraujo mėginiai vidutiniškai (72 + 28) ml, ir leukocitų skaičius pavyzdyje vidutiniškai pilnas - (1,1 + 0,6) x x 107. Bambagyslės kraujo dėl sterilumo (bakterinio užterštumo analizė, ŽIV-1 virusų hepatito B ir C, sifilio, ir citomegaloviruso infekcijos) tik į vieną mėginio buvo nustatyti IgG antikūnus hepatito C kitoje tyrimą, kai placentos po gimimo vaisiaus paviršius buvo dedamas ant specialaus rėmo žemyn, laidas buvo gydomi 5% natrio jodas ir 75% etilo -oji alkoholis. Viršūnės virvės buvo nusausintos adata iš perpylimo sistemos (G16). Kraujas tuštinamas į indą spontaniškai. Tokiu būdu paimtas kraujo tūris vidutiniškai (55 + 25) ml. Popieriaus G. Kogler ir kt (1996) virkštelės kraujo paimti uždara būdas ir gauti didelius kiekius kraujo - vidutiniškai (79 + 26) ml. Autoriai pažymi, kad tarp 574 virkštelės kraujo mėginiai yra maždaug 7% mažiau nei 40 ml kraujo, kuri neleidžia juos naudoti transplantacijai. K. Isoyama et al (1996), atsižvelgiant laido kraujo aktyvia exfusion naudojant švirkštus, gavo iš 69,1 ml kraujo vidutiniškai (laidas kraujo tūris; svyravo nuo 15 iki 135 ml). Galiausiai A. Abdel-Mageed PI bendradarbiai (1997) pagal punovinnoy venų kateterizacija buvo gauta vidutiniškai 94 ml virkštelės kraujo (nuo 56 iki 143 ml).

Siekiant sumažinti jatrogenine infekcijos ir užterštumo motinos išskyros išsivysčiusiose uždara sistema kraują remiantis plačiai naudojami transfuzioinoy sistemos Baxter Healthcare Corp Deerfield, IL (JAV) riziką, kurių sudėtyje yra 62,5 ml CPDA (citrato-fosfato-dekstrozė su adenino), kaip antikoaguliantas. Už gaminant medžiagą technologija yra labai svarbu, skirto kokybės mėginiu, palyginus turinio ir grynumo ląstelių suspensijos suma preparato. Esamų metodų virkštelės kraujo surinkimą, kotoryeuslovno pirmasis skirstomi į uždaras, pusiau atviros ir atviros sistemos sleduetotdavat pirmenybė, kaip ir uždaroje sistemoje žymiai sumažina užteršimo mikrobais medžiagos riziką, taip pat užteršimo ląstelių suspensijos gimtosios langelį.

A. Nagleris ir jo bendraautoriai (1998) atliko lyginamąją visų trijų virkštelės kraujo mėginių ėmimo sistemų efektyvumo analizę. Pirmajame variante procedūra buvo atlikta uždaroje sistemoje, kraujo išpylimas tiesiai į konteinerį. Antruoju variantu nugaros kraujas buvo gautas taikant aktyvaus kraujo išmetimo į švirkštus metodą1, toliau plakant placentos veną ir tuo pačiu metu išleidžiant kraują į talpyklą (atviras metodas). Trečiuoju variantu kraujas buvo atšauktas pusiau atviroje sistemoje, aktyviai ištraukdamas jį švirkštais ir plaunant virkštelės arteriją kartu su išpūtimu į talpyklą. Pirmojoje versijoje autoriai gavo nugaros smegenų kraują (76,4 + 32,1) ml, o leukocitų skaičius (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ už 1 ml kraujo. Antrame variante atitinkami indeksai buvo (174,4 + 42,8) ml ir (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; trečiajame - (173,7 + 41,3) ml ir (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Naudojant atvirą sistemą, buvo pastebėta dažniausia nugaros smegenų kraujo mėginių infekcija. Nustatyta tiesioginė koreliacija tarp placentos masės ir ekstrahuojamo kraujo tūrio - didėjant placentos masę, kraujo surinkimo kiekis didėja.

Po bambagyslės kraujo mėginių ėmimo atskyrimo žingsnis seka mononuklearinių ląstelių izoliavimą ir ląstelių suspensijos valymą iš eritrocitų. Pagal eksperimento sąlygas branduolio ląstelės yra išskirtos jų nusodinimo būdu naudojant metilceliuliozę amonio eritrocitų lizėje chloridu. Tačiau klinikiniais tikslais metilceliuliozė neturėtų būti naudojama, nes kraujo gimdos kaklelio ląstelių praradimas pasiekia 50-90%. Lizuoja eritrocitus, susijusių su didelės apimties darbo tirpalo klinikoje taip pat vargu ar atliekamas, nors atskyrimas procentas tokiu būdu branduolius turinčioms ląstelėms su CD34 + ląstelių fenotipo ir kamieninių ląstelių KSV-GM funkcijos ir KSV-GEMM gerokai didesnė. Buvo pranešta apie naują agentą mononuklearinių ląstelių izoliavimui tankio gradiento pirkėjo tankio tirpale (BDS72). Ši medžiaga turi tokius fiziologinius parametrus: pH - 7,4, osmolality - 280 mosm / kg, tankis - 1,0720 g / ml. Pasak autorių, su jo pagalba galima izoliuoti iki 100% CD34 teigiamų ląstelių ir pašalinti 98% raudonųjų kraujo kūnelių. Tačiau klinika dar nepriima BDS72.

Testuojami branduolius turinčių ląsteles nuo bambagyslės kraujo atskyrimo metodai yra paprastai naudojamas 10% HES tirpalą arba 3% želatinos tirpalas. Abiejuose atvejuose eritrocitų nusėdimo efektyvumas ir branduolių ląstelių izoliavimas yra maždaug vienodas. Tačiau, kai naudojamas kaip sedimenting agentas želatinos galimas atvejis, kad gauti šiek tiek didesnį skaičių KSV-GM, nei tada, kai naudojant HES. Manoma, kad išsaugojimas efektyvumo KSV-GM nevienodo greičio skirtumas dėl nusėdimo atskirų frakcijų arba branduolį ląstelių gebėjimą SES molekulių sugerti kraujodaros ląstelių paviršiaus receptorių ir tokiu būdu blokuoti jų jautrumą kolonijas stimuliuojantis faktorius, kurie yra naudojamas, kai kultivavimą CFU-GM in vitro. Nepaisant to, abu sedimentatoriai gali būti tinkami izoliuoti branduolio ląsteles kuriant didelės apimties virkštelės kraujo bankus.

Principai nugaros kraiko atskyrimo ir kriokozės išsaugojimo metodai nesiskiria nuo tų, kurie naudojami suaugusių donorų periferinio kraujo ir sąnarių kraujo kūnelių kraujo kūnelių ląstelėmis. Tačiau kai bankai rengia daugybę juostinių kraujo mėginių, atskyrimo metodai pirmiausia turi būti pigūs. Todėl dabar, deja, klinikiniams poreikiams jau naudojami įprasti nugaros smegenų kraujo ląstelių izoliavimo ir kriokozės metodai, o eksperimentų dalyviai išlieka veiksmingesni, tačiau finansiškai veiksmingi metodai.

Bendras vertinimo kriterijai įsitvirtino hematopoetinės ląstelių skaičių reikalavimus ir į virkštelės kraujo mėginių tyrimas, siekiant aptikti infekcinių agentų. Siekiant užtikrinti kraujotakos kraujo kūnelių transplantaciją, visi kraujo mėginiai turi būti ištirti visų pirma dėl hematogeninių infekcijų ir genetinių ligų. Kai kurie autoriai rekomenduoja papildomus specialius metodus tyrimo virkštelės kraujo už diagnozuoti genetines ligas, pavyzdžiui, talasemija ir pjautuvo pavidalo ląstelių anemija, adenozindeaminazės trūkumas, agamaglobulinemija Bruton, ligų Harlera ir Fonai tikslu.

Atsižvelgiant į rekomendacijas Ticheli L. Et al (1998), kiekvienu bambagyslės kraujo mėginį, yra būtina, siekiant nustatyti branduolį ląstelių, SB34-teigiamų ląstelių ir KSV-GM skaičių, HLA-rašyti, siekiant nustatyti kraujo grupę ABO ir Rh jos narystės. Be to, kristaliklio atliktas bakteriologinius, serologinius tyrimus dėl ŽIV ir CMV infekcijos, HBsAg, hepatito C, HTLY-I ir II HTVL-(T-ląstelių leukemijos, gautas iš žmogaus), sifilio, toksoplazmozės. Polimerazės grandininė reakcija į citomegalovirusą ir ŽIV infekcija yra privaloma.

Pati kanalo kraujo gavimo tvarka turėtų būti vykdoma griežtai laikantis medicinos bioetikos principų. Prieš pradedant kraujo surinkimą, būtina gauti nėščios moters sutikimą ją įgyvendinti. Preliminari pokalbis su nėščia moterimi gauti informuotą sutikimą atlikti visas manipuliacijas, nes kraujo exfusion užpildymo ir apdailos dokumentai yra atliekamas tik sveikatos priežiūros specialistams. Bet kuriuo atveju nepriimtinu, atliekančią kurią nors iš šių procedūrų darbuotojai su biologiniais, chemijos, farmacijos ir kitų ne medicininį išsilavinimą, atsižvelgiant į nustatytas normas bioetikos ir žmogaus teisių pažeidimas. Teigiamų testų nešiklio HBsAg, antikūnų prieš sukėlėją hepatito C, ŽIV ir sifilio laidas kraujo nebus imtasi, ir surinktos kraujo mėginiai jau yra išmetami ir sunaikinti. Reikėtų pažymėti, kad latentinis infekcijų vežimas naujagimiams yra daug retesnis nei suaugusiems, todėl hematogenous perdavimo ir plėtros infekcinių komplikacijų kraujodaros infuzijų virkštelės kraujo ląstelių tikimybė yra žymiai mažesnė negu transplantacijos kaulų čiulpų nuo suaugusiųjų donorų atveju.

Svarbus taškas taikymo virkštelės kraujo klinikoje yra skiepų, kuri yra grindžiama kiekybinio kraujodaros kamieninių ląstelių iš virkštelės kraujo ląstelių mėginį ir dozių reikia transplantacijos vertinimas. Dar neparengtos transplantacijai reikalingų nugaros smegenų kraujo kūnelių optimalaus skaičiaus standartai. Nėra visuotinai pripažįstamo požiūrio net į tokius įprastus parametrus kaip CD34 teigiamų ląstelių skaičius ir CFU-GM. Kai kurie autoriai įvertino kraujodaros ląstelių potencialą analizuojant ilgalaikius kultūrų ryžtingai į bendrus granuliocitų, eritrocitų, monocitų ir megakariocitai kolonijas sudarančių vienetų kiekis - KSV-GEMM.

Tačiau klinikinėse sąlygose standartinis virkštelės kraujo transplantacijos vertinimas paprastai apima tik branduolių arba mononuklearų ląstelių skaičiaus nustatymą.

Kraujo kraujo kraujotakos kraujo ląstelių laikymas

Kai kurios problemos egzistuoja kraujo kūnelių kraujo kūnelių laikymo technologijoje. Kai kraujodaros kamieninių ląstelių kriogeninis konservavimas, kad būtų pasiektas optimalus jų užšalimo režimą turi minimumo sumažintų smegenų kraujo ir raudonųjų kraujo kūnelių anksčiau pašalinti, kad būtų išvengta hemolizę kiekį ir nesuderinamumo reakcijos eritrocitų antigenus (ABO, Rh) riziką. Tuo tikslu tinka įvairūs nukleistų ląstelių išskyrimo būdai. Pradžioje 90-ųjų praėjusio šimtmečio plačiausiai naudojamas metodas atskirti branduolius turinčioms ląstelėms per tankio gradiento remiantis Ficoll su 1.077 tankis g / ml, arba filtravimo su tankiu 1.080 g / ml. Atskyrimas virkštelės kraujo iki tankio gradiento leidžia pasirinkti daugiausia vienbranduolėse ląsteles, bet veda prie didelių nuostolių kraujodaros kamieninių ląstelių - iki 30-50%.

Hidroksietilkrakmolo sedimentacijos efektyvumas nugaros smegenų kraujo ląstelių izoliavimo procese yra įvertintas įvairiais būdais. Kai kurie autoriai nurodo žemą atskyrimo kokybę taikydami šį metodą, o kiti tyrėjai, atvirkščiai, tarp visų galimų metodų pageidauja, kad HSC kanalų kraujas būtų tiksliai paskirstomas naudojant 6% hidroksietilkrakmolo tirpalą. Tai rodo didelį hemopoetinių ląstelių sedimentacijos efektyvumą, kuris, remiantis kai kuriais duomenimis, siekia nuo 84% iki 90%.

Rėmėjai kitu požiūriu manau, kad beveik visiems frakcionavimo procesams įtraukti didelius nuostolius yadrosoderzhashih ląsteles ir pasiūlyti padaryti atskyrimą centrifuguojant, kad virkštelės kraujo atskirti į 3 frakcijos: eritrocitų, leukocitų ir plazmos žiedą. Atskirti tokiu būdu ląsteles, išradėjai nustatė, kad iš vienabranduolėse ląstelių pradžioje kraujodaros kamieninių ląstelių ir ląstelių CD34 + imunoprofilį turinys galiausiai buvo atitinkamai 90, 88 ir 100% originalus lygiu. Panašūs kiekiai išvalyto augimo šioje virkštelės kraujo ląstelių, gautų kitų tyrėjų metodas: po nusėdimo branduolį skiriama 92%, 98% - mononuklearinių, 96% - CD34 teigiamų ląstelių ir 106% kolonijas sudarančių vienetų.

Dešimtojo dešimtmečio pabaigoje želatina buvo plačiai naudojama kaip sedimentavimo agentas. Klinikinėje praktikoje, naudojant želatina kraujodaros kamieninių ląstelių, išskirtų iš virkštelės kraujo, nes 1994 m. Naudojant 3% želatinos tirpalą, branduolių ląstelių izoliavimo efektyvumas siekia 88-94%. Plačiai naudoti želatinos kuriant virkštelės kraujo bankas patvirtino savo privalumus prieš kitus priemonėmis nuosėdų. Lyginamoji analizė visus minėtų metodų izoliacijos branduolį ląstelės pagal jų nuosekliam vartojimui kiekvienu bandymo virkštelės kraujo mėginių parodė, kad optimalus sedimenter Išsiregistravimo vieno branduolio ląstelių su fenotipo CD34 + / CD45 +, taip pat pagal KSV-GM ir CFU-GEMM skaičius yra 3% želatinos tirpalas. Pasirodė, kad reikšmingai mažiau veiksmingas metodais, naudojant Ficoll tankio gradientą, ir iš metilo celiuliozės ir hidroksietilo krakmolo, kuriame yra naudojamas kraujodaros ląstelių nuostoliai pasiekė 60%.

Nugaros kraujo kamieninių ląstelių transplantacijos apimties išplėtimas yra susijęs ne tik su jų gamybos, bet ir saugojimo metodų kūrimu. Yra daugybė problemų, tiesiogiai susijusių su virškvizijos kraujo paruošimu ilgalaikiam saugojimui, ir optimalios kriokozės išsaugojimo technologijos pasirinkimas mėginiams. Tarp jų yra klausimai, ar tikslinga atlikti atskyrimo procedūras, naudoti įvairias kriokoprąsuojančias terpes ir panaudoti atleidžiamų ląstelių paruošimo transplantacijai metodus. Nugaros smegenų kraujo mėginių vežimas dažnai atliekamas iš toli nuo hematologinių centrų esančių regionų. Atsižvelgiant į tai, kyla problemų dėl leistinų virkštelės kraujo laikymo laikotarpių nuo jo gavimo iki kriokozės pradžios, o tai ypač svarbu kuriant virkštelės kraujo bankus.

Funkcinės veiklos kraujodaros virkštelės kraujo ląstelių po ilgalaikio saugojimo (iki 12 metų) skystame azote tyrimas atskleidė, kad apie 95% kraujodaros ląstelių per šį laiką nepraranda savo aukštą dauginimosi gebą. Popieriaus Yurasova S. Et al (1997) parodė, kad laido kraujo laikomi esant kambario temperatūrai (22 ° C) arba, esant 4 ° C temperatūroje 24 valandų ir 48 nėra iš esmės sumažinti hematopoetinę ląstelių gyvybingumą, kad pradinis lygis yra tinkamai 92 ir 88%. Tačiau, jei laikymo trukmė pratęsiama iki trijų dienų, gyvybingų nukleistinių ląstelių skaičius virkštelės kraujyje gerokai sumažėja. Tuo pačiu metu, kiti tyrimai parodė, kad saugojimo 2-3 dienas, esant 22 ° C temperatūroje arba 4 temperatūros per daugiausia paveikė subrendusių granulocitų gyvybingumą, bet ne kraujodaros ląsteles.

Viršutinio kraujo kraujo kūnelių ląstelių gyvybingumą gali neigiamai paveikti sistemos komponentai, skirti jo surinkimui. Analizė skirtingų antikoaguliantų poveikis, kuris veiksmų mechanizmas yra dėl jungimosi kalcio jonų (ACD, EDTA, XAPD-1), skirtas kraujodaros kamieninių ląstelių bambagyslės kraujo laikymo sąlygos 24 iki 72 valandų atskleidė jų neigiamą poveikį branduolį ląstelių gyvybingumo. Šiuo atžvilgiu, autoriai rekomenduoti PBS (fosfatinio buferio tirpalo) naudojimą su nevalyto heparino to be konservanto po 20 U / ml, kuri, jų nuomone, leidžia padidinti saugojimo nefrakcionuotame laidas kraujo up trukmę iki 72 valandų ir išsaugo funkcinį aktyvumą kolonijas sudarančių vienetų koncentraciją. Tačiau, atsižvelgiant į apsaugos KSV-GM ir CFU-G studijų parodė, kad virkštelės kraujo saugojimo laiką prieš kriokonservavimas neturėtų viršyti devynių valandų. Akivaizdu, kad šiuo atveju turėtų veikti principą, kad jei yra prieštaringi duomenys turėtų būti naudojamas mažiausias rekomenduojamas virkštelės kraujo saugojimo gyvenimą ir pradėti programuojamas įšaldymo izoliuotas ląsteles taip greitai, kaip įmanoma.

Kai užšaldžius kraujo kūnelio kraujo kūnelių kamienines ląsteles, 10% DMSO tirpalu paprastai naudojamas kaip krioklo apsaugos priemonė. Tačiau, be išreikšto kriozoidinio poveikio, šioje koncentracijoje esantis dimetilsulfoksidas turi tiesioginį citotoksinį poveikį net esant sąlyčiui su minimaliu kraujo formuojančių virkšelių kraujo ląstelių susidarymu. Siekiant sumažinti DMSO citotoksinį poveikį, nulinės ekspozicijos temperatūra, visų manipuliavimų ir pakartotinio plovimo greitis padidėja po nugaros smegenų mėginių atšildymo.

Nuo 1995 m. Ukrainos Medicinos mokslų akademijos hematologijos ir transfusiologijos institutas išplėtojo mokslinį kryptį, kurio tikslas - ištyrinėti virkštelės kraują kaip alternatyvų gimdos kaklelio kraujo ląstelių šaltinį. Visų pirma, buvo sukurtos naujos technologijos, skirtos nefrakcionuoto ir frakcionuojamo virkštelės kraujo kraujo krešėjimo mažosioms temperatūroms kryozems išsaugoti. Kaip krio apsauga naudojamas mažos molekulinės masės medicininis polivinilpirolidonas. Nefrakcionuoto virkštelės kraujo kriokozės metodas pagrįstas originalia ląstelių paruošimo įšaldymo technologija ir ląstelių suspensijos specialaus gydymo technika prieš pat transplantaciją.

Vienas iš svarbiausių faktorių, turinčių įtakos kriaušių protezuotų kraujo kamieninių ląstelių funkcinei veiklai, yra ląstelių suspensijos aušinimo greitis, ypač kristalizacijos fazėje. Programinis metodas sprendžiant greičio ir užšalimo trukmės problemą suteikia puikias galimybes kurti paprastus ir labai veiksmingus kriokozės metodus, neplautą ląstelių suspensiją nuo kriokloaktyviųjų medžiagų prieš transplantaciją.

Greito užšalimo ir atšildymo etapai yra labiausiai pavojingi ląstelių gyvybingumui jų paruošimo metu. Įšaldant hemopoetines ląsteles, didelė jų dalis gali būti sunaikinta perėjimo tarp interferoninės terpės metu nuo skysčio iki kietos fazės kristalizacijos momento. Siekiant sumažinti ląstelių mirtingumo procentą, naudojami krio apsaugai, jų veikimo mechanizmai ir kriokozicinis veiksmingumas mokslinėje literatūroje buvo tinkamai aprašyti.

Perspektyvi kryptis optimizavimas Metodai kriokonservavimas kaulų čiulpuose ir virkštelės kraujo ląstelių yra sujungti tuo pačiu tirpalu nedidelės koncentracijos cryoprotectants su keliais skirtingais veikimo mechanizmais, pavyzdžiui, veikiantis ląstelėje lygio DMSO ir hidroksietilmetakrilatu krakmolo arba albumino turinčio neląstelinę apgaubiantis poveikį.

Už kriogeninis konservavimas iš smegenų kraujo kūnelių yra tradiciškai naudojami 20% DMSO tirpalas, kuris yra visam laikui mechaniškai maišant ledo vonioje, buvo lėtai pilamas į ląstelių suspensijos pasiekti lygi (1: 1) tūrių santykis ląstelių suspensijos ir cryoprotectant. Galutinė dimetilo sulfoksido koncentracija yra 10%. Po to ląstelių suspensija atšaldoma programine kreiso srove, kurios greitis yra HS / min iki -40 ° C, po to aušinimo greitis padidinamas iki 10 ° C / min. Pasiekus -100 ° C, konteineris su ląstelių suspensija yra dedamas į skystąjį azotą (-196 ° C). Naudojant šį kriofunkcinį metodą, funkciškai aktyvių mononuklearinių ląstelių saugumas po atšildymo siekia 85% pradinio lygio.

Kryozminių konservavimo metodų modifikavimas yra skirtas sumažinti DMSO koncentraciją, pridedant hidroksietilkrakmolo (atitinkamai 5% ir 6% dimetilo sulfoksido ir hidroksietilkrakmolo galutinė koncentracija). Šio mišrūnų ląstelių suspensijos užšaldymas yra aukštas, o ne mažiau citoprotekcija nei vienintelis 10% dimetilsulfoksido tirpalas. Gyvybingų branduolių ląstelių skaičius pasiekė 96,7% bazinio lygio, o jų funkcinis aktyvumas, apskaičiuotas pagal CFU-GM skaičių, buvo 81,8%.

Kai naudojant tirpalas dimetilsulfokside, kurio koncentracija svyruoja nuo 5 iki 10%, kartu su 4% hidroksietil krakmolo (galutinės koncentracijos) nustatė, kad CD34-teigiamas ląstelių šių diapazonų išsaugojimas dimetilsulfoksidą praktiškai nepakitęs. Tuo pačiu metu sąlygomis sumažinti DMSO koncentracija nuo 5 iki 2,5% masės yra stebimas mirties smegenų kraujo kūnelių - gyvybingų ląstelių vienetų yra sumažintas nuo 85,4 iki 12,2%. Kiti autoriai taip pat išvadą, kad jis buvo 5 ir 10% tirpalas dimetilsulfoksido (į autorių įgyvendinimo variante - kartu su autologinio kraujo serume) su maksimaliu efektyvumu teikti citoprotekciją kriokonservavimas laido kraujo SSK metu. Be to, aukšto lygio saugos paeiliui užšaldyti ir atšildyti ląstelė yra pažymėtos gaminant kombinuotą 5 arba 10% DMSO 4% hidroksietil krakmolo tirpalo atveju, ypač tuo valdomos aušinimo norma TOS / min. Kitoje naudojamo popieriaus krioapsauginį tirpalą, susidedančios iš trijų sudedamųjų dalių jau - DMSO, išgrynintas žmogaus albumino ir RPMI terpe santykiu 1: 4: 5, kurį buvo įdėta į ląstelių suspensijos iki tūriu santykis (galutinis DMSO koncentracija buvo 5%). Po atšildymo vandens vonioje + 4 ° C temperatūroje CFU-GM sauga viršijo 94%.

Kai kurie autoriai siūlo naudoti nefrakcionuotą virkštelės kraują kriokozės išsaugojimui, nes raudonųjų kraujo ląstelių pašalinimui prarandama daug kraujo kūnelių. Šiame įgyvendinimo variante 10% dimetilsulfoksido tirpalas yra naudojamas mononuklearinių ląstelių apsaugai nuo žalingo kriokristalizacijos poveikio. Užšaldymas atliekamas esant pastoviam aušinimo greičiui HS / min iki -80 ° C, po kurio nugaros smegenų kraujo kūnelių suspensija panardinama į skystąjį azotą. Šio šaldymo metodu vyksta dalinis eritrocitų lizė, todėl kraujo mėginiai nereikalauja frakcionavimo. Po atšildymo ląstelių suspensija išplaunama iš laisvo hemoglobino ir dimetilsulfoksido žmogaus albumino tirpale arba paciento autologiniame serume ir naudojamas transplantacijai.

Išsaugojimas kraujodaros kamieninių ląstelių po atšildymo nefrakcionuoto virkštelės kraujo tikrai didesnis nei frakcionuotas, bet ryšium su krioustoychivostyu raudonųjų kraujo ląstelių, gali sukelti rimtų problemų, kaip iš po transfuzijos perpilant ABO-nesuderinama eritrocitų rezultatas. Be to, saugomas nefrakcionuotas kraujas gerokai padidėja. Iš klinikinio požiūriu, dar geriau kriogeninis konservavimas anksčiau išskiriamas ir gryninamas iš kitų ląstelinių frakcijų bambagyslės kraujo ląstelių kraujodaros.

Visų pirma, metodas yra kriogeninis konservavimas iš bambagyslės kraujo ląstelių frakcionuotas leidžiant pašalinti eritrocitai preparato šaldymui, kuri naudoja 6% tirpalo hidroksietilo krakmolu kompozicija plazmozameshchath tirpalo "Stabizol". Po atšildymo gautoji ląstelių suspensija yra paruošta klinikiniam naudojimui be papildomų manipuliavimo.

Taigi, šiuo metu yra daug gana veiksmingų būdų, kaip kraujo kryžiaus išsaugojimas. Pagrindinis skirtumas yra tas, kad paruošimo etape kraujo mėginiai užšaldomi nefrakcionuojami arba atskiriami į ląstelių frakcijas, be to, eritrocitų mišinys neskirtas.

Virškinimo trakto kraujo kraujo kamieninių ląstelių transplantacija

80-ųjų pabaigoje - praėjusio šimtmečio 90-ųjų pradžioje nustatyta, kad nėštumo metu vaisiaus kraujas, gaunantis vaisius, pasižymi dideliu hematopoetinių kamieninių ląstelių kiekiu. Santykinis paprastumas gauti nugaros smegenų kraujo ląsteles ir akivaizdžių etikos problemų nebuvimas leido praktinėje medicinoje naudoti nugaros kraujo kamienines ląsteles. Pirmas sėkmingas nugaros kraujo persodinimas vaikui su Fanconi anemija buvo pradinis taškas, leidžiantis išplėsti nugaros smegenų kraujo kamieninių ląstelių transplantaciją ir sukurti banko aprūpinimo sistemą. Visame pasaulyje nugaros smegenų kraujo bankų sistemoje didžiausias yra Niujorko placentinio kraujo centras, kuris yra Nacionalinių sveikatos institutų balanse. Saugomų laidų kraujo mėginių skaičius šiame banke artėja prie 20 LLC. Taip pat auga gavėjų (dažniausiai vaikų) skaičius ir sėkminga transplantacija. Pasak JAV Sveikatos apsaugos ministerijos, HSC nugaros kraujo recipientų gyvenimo be transplantacijos laikotarpis, kuris nebuvo atkurtas, jau viršijo 10 metų.

Tai nestebina, nes daug studijos kraujodaros potencialo virkštelės kraujo parodė, kad kiekybė ir kokybė iš pirmųjų kamieninių ląstelių ne tik yra ne mažesnis nei suaugusiųjų žmogaus kaulų čiulpuose, bet ir kai kurios priemonės viršyti ją. Aukštesnis proliferacinis potencialas bambagyslės kraujo kamieninių ląstelių sukėlė vystymosi ląstelių signalizacijos funkcijas, receptorių buvimas HSCs į konkrečias augimo faktorių, iš bambagyslės kraujo ląstelių gebėjimą autokrining gamybą augimo faktorių, didelio dydžio ir ilgio Telomera.

Tokiu būdu, genomų ir fenotipinės savybės kraujodaros kamieninių ląstelių laidas kraujo iš anksto nustatyti kokybės prigijimą aukštos potencialaus donoro kraujodaros atkūrimo recipiento.

Virkštų kraujo kraujo kūnelių ląstelių privalumai

Tarp realių privalumų naudojant kraujodaros virkštelės kraujo kamienines ląsteles transplantacijai per kitų šaltinių kraujodaros ląstelių, reikėtų pažymėti, beveik nulis pavojų donoro sveikatai (jei ne laikomas tokiu placentą), o pašalinant bendrąją anesteziją reikia. Iš virkštelės kraujo ląstelių transplantacijos naudojimas plečiasi dėl iš dalies HLA-suderinama transplantato sistemos (Nesuderinamumas nuo vieno iki trijų antigenų). Iš ilgalaikio saugojimo kraujodaros virkštelės kraujo ląstelių technika sušaldytas, kuris padidina gauti retą HLA-type tikimybę ir sumažina paieškos laiką HLA-atitiko alogeninės transplantacijos. Tuo pačiu metu ženkliai sumažėja rizika susirgti kai kuriomis latentinėmis infekcijomis, kurias perduoda perdavimo būdas. Be to, yra ir nebrangi biologinio gyvybės draudimo forma, susijusi su galimybe naudoti audinių kraujo ląsteles autologinei transplantacijai.

Tačiau dėl mažos apimties kraujo, kad gali būti renkami iš placentos (AN ne daugiau kaip 100 ml vidutiniškai) pirmą vietą gauti didžiausią įmanomą sumą kraują iš virkštelės veną griežtai laikantis minimalių rizikos bakterinio užterštumo virkštelės kraujo gautų mėginių sąlygomis problemą.

Primityvūs hematopoetinių ląstelių iš bambagyslės kraujo paprastai žymimas buvimą ant jų paviršiaus glikofosfoproteina CD34, ir dėl jų funkcinių savybių pagrindu, tikrindama clonogenic mėginyje arba kolonijas sudarančių vienetų išsidėstymą in vitro. Lyginamoji analizė parodė, kad virkštelės kraujo ir kaulų čiulpų didžiausio kiekio CD34-teigiamas vienbranduolių ląstelių frakcijoje yra atitinkamai 1,6 ir 5,0%, maksimali kolonijas sudarančių vienetų nuo CD34 + ląstelių pogrupį - 80 ir 25%, iš viso klonavimo efektyvumo CD34 + -cells - 88 ir 58%, didžiausias kolonijas sudarančių ląstelių su aukštos proliferacinis galimą (HE-KUB -populyatsii CD34 +) - 50 ir 6,5%. Reikėtų pridurti, kad klonavimas efektyvumas CD34 + CD38 ląstelių ir gebėjimą reaguoti į citokinų stimuliacijos taip pat didesnis kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės kraujo.

Derinys fenotipinės antigenai Thy-1, CD34 ir CD45RA patvirtina aukštą dauginimosi gebą laido kraujo kraujodaros ląstelių, ir raišką iš trijų antigenais laido kraujo ląstelių paviršiuje rodo, kad jie priklauso kamieninių ląstelių. Be to, nustatyta, kad nugaros kraujyje yra ląstelių, turinčių CD34 + fenotipą, neturinčius linijinio diferenciacijos žymenų. Lygis virkštelės kraujo ląstelių gyventojų grupėse su fenotipo profilis CD34 + / Lin yra maždaug 1% bendro skaičiaus CD34 teigiamų ląstelių. Hematopoetinių kamieninių ląstelių sukelti į smegenų kraujo, kaip pačias limfoidinių ląstelių linijų, ir linijinio daugiapotencinės mieloidinės ląstelių diferenciacijos, kuri taip pat rodo, kad jie priklauso kamieninių ląstelių skaičių.

Kaip jau minėta, esminiai skirtumai tarp kaulų čiulpuose ir virkštelės kraujo yra dydžio, gauto vieno naudojamo transplantacijos kraujodaros ląstelių mėginių ėmimo tvarkos. Kai kaulų čiulpų transplantacijos praradimas ląstelių masės atskyrimo procesą, kriokonservavimas, atšildymo ir bandymai yra leistina į 40-50% intervale, laidas kraujo ląstelės tokie nuostoliai yra labai reikšminga, nes naudojant nepakankamą skaičių HSC transplantacijos gali būti nepagrįsta. Pasak G. Kogler et al (1998), ląstelių transplantacijos recipiento kūno svorio 10 kg potencialas transplantacijos (iš viso surinktų virkštelės kraujo mėginių - 2098), gali būti visi laidas kraujo mėginiai, kūno svorio 35 kg - 67%, o tik 25% mėginių gali būti veiksminga transplantacija pacientams, kurių kūno svoris yra 50-70 kg. Šis klinikinis situacija rodo, kad būtina optimizuoti ir pagerinti esamų mėginių ėmimo metodus, reprodukcijai ir saugojimo virkštelės kraujo ląstelių efektyvumą. Todėl standartizacijos mėginių ėmimo metodus, bandymų, atskyrimo ir kriokonservavimas iš virkštelės kraujo klausimai dabar yra plačiai diskutuojama literatūroje už kraujo bankų, jo naudojimo klinikoje kūrimo, taip pat steigimo sąlygas ir terminus saugojimo kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės kraujo.

[7], [8], [9],

Nugaros kraujo kraujotakos kraujo ląstelių panaudojimas medicinoje

Paprastai iki 10 ⁶ hematopoetinių kamieninių ląstelių galima išskirti iš nugaros smegenų kraujo , rečiau - daugiau. Atsižvelgiant į tai, iki šiol išlieka klausimas dėl tiek daug kraujo ląstelių kraujo ląstelių, kad būtų atkurtas suaugęs recipiento kraujospūdis. Nuomonės šiuo klausimu buvo suskirstytos. Kai kurie mokslininkai mano, kad ši suma yra pakankama transplantacijos vaikams, bet per maža, kad persodinti suaugusio žmogaus, kuriam administracija yra optimalus (7-10) × 10 ⁶ CD34 teigiamų ląstelių už 1 kg kūno svorio - vidutiniškai 7 × 10 ⁸ už transplantaciją. Iš šių skaičiavimų matyti, kad viename bambos kaklelio mėginyje yra 700 kartų mažiau kraujo kūnelių kamieninių ląstelių nei reikalinga vienam pacientui transplantuoti suaugusiesiems. Tačiau toks kiekybinis įvertinimas atliekamas pagal analogiją su transfuzuoto ląstelių skaičiumi kaulų čiulpuose ir visiškai ignoruoja hematopoezės ontogenetinius požymius.

Visų pirma, jis ignoruoja faktą, kad didesnį dauginimosi pajėgumą kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės kraujo, palyginti su kraujodaros kamieninių ląstelių kaulų čiulpuose. Kolonijų formavimo potencialo tyrimų in vitro rezultatai rodo, kad viena virkštelės kraujo dozė gali padėti atkurti suaugusiųjų recipiento hematopoizmą. Kita vertus, mes neturėtume pamiršti, kad HSCs skaičius sumažėja net embrioninio vystymosi procesas: CD34 teigiamų ląstelių turinį bambagyslės kraujo tiesiškai sumažinti 5 kartus per 20 savaičių laikotarpį (kraujo už tyrimą buvo gautas atveju priešlaikinio nėštumo nutraukimo) iki 40 nėštumo savaičių (fiziologinių gimdymų laikotarpis), kuris lydimas lygiagrečios, nuolatinės linijinių citodiferencijavimo žymenų išraiškos padidėjimo.

Dėl standartizuotą metodą į kiekybinio virkštelės kraujo mėginiuose kamieninėms ląstelėms ginčas optimalaus dozę kraujodaros kamieninių ląstelių bambos kraujo ir toliau trūksta. Kai kurie mokslininkai mano, kad kaip kriterijų parinkimas virkštelės kraujo mėginių, gali būti naudojamas su branduoliu ląstelių ir vienabranduolėse ląstelių skaičių, perskaičiuoti į gavėjo kūno svorio, tai yra, jų dozę. Kai kurie autoriai mano, kad CD34 + ląstelių minimali kiekybinė riba, net atliekant autologinę HSC transplantaciją, yra 2 x 10 ⁶ / kg. Į kraujodaros ląstelių dozę iki 5 × 10 ⁶ ląstelių / kg (iš viso 2.5) jau suteikia labiau tinka pradžioje po transplantacijos, sumažina infekcinių komplikacijų ir sutrumpina prevencinio antibiotikais laikotarpį.

Pagal E. Gluckman et al (1998), hematologinių sėkmingo transplantacijos bambagyslės kraujo kūnelių ji yra ne mažiau kaip 3,7 × 10 įvadas ⁷ branduolį ląstelių viename 1 kg kūno svorio gavėjui. Mažinant kraujodaros kamieninių ląstelių dozę iki 1 × 10 ⁷ arba mažiau branduolį ląstelių viename 1 kg kūno svorio paciento ir rizikos transplantato nepakankamumas pasikartojantys vėžio kraujo žymiai padidėja. Reikia pripažinti, kad dar nėra žinomas mažiausias progenitorių ląstelių kiekis, reikalingas greitam hemopozezei po GSG allotransplantacijos. Teoriškai tai gali būti pasiekta naudojant vieną ląstelę, bet klinikinių kaulų čiulpų transplantacijos greito ir stabilaus prigijimą garantuota perpylimo ne mažiau kaip (1-3) × 10 ⁸ branduolius turinčių ląstelių už 1 kg paciento kūno masės.

Neseniai atliktas išsamus tyrimas siekiant nustatyti optimalų HSC kiekį onkohematologijoje apima pacientų stebėjimą iš trijų grupių, išskirtų priklausomai nuo CD34 teigiamų ląstelių kiekio transplantacijos medžiagoje. Pirmosios grupės pacientai gavo (3-5) x 10 ⁶ ląstelių / kg. HSC dozė antrosios grupės pacientams buvo (5-10) x 10 ⁶ ląstelių / kg, o trečiosios grupės pacientai transplantavo daugiau kaip 10 x 10 ⁶ CD34 + ląstelių / kg. Geriausi rezultatai buvo gauti transplantacijos gavėjų grupėje, kuriuose CD34 teigiamų ląstelių skaičius buvo toks (3-5) x 10 ⁶ / kg. Perdozavusių ląstelių dozę padidinus daugiau kaip 5 × 10 ⁶ / kg, statistiškai reikšmingos naudos nenustatyta. Tuo pačiu metu labai didelis HSC kiekis transplantuojant (> 10 x 10 ⁶ / kg) yra susijęs su dideliu likusių navikų ląstelių reinfuzija, dėl kurios atsiranda ligos atsinaujinimas. Tarp transplantuotų alogenezinių progenitorių ląstelių skaičiaus ir "transplantato prieš šeimininką" reakcijos atsiradimo nebuvo tiesioginio ryšio.

Sukaupta pasaulinė HSC virkštelės kraujo transplantacijos patirtis patvirtina jų didelį repopuliacijos potencialą. Virvelės kraujo transplantacijos įsisavinimo greitis koreliuoja su įvestų branduolių ląstelių skaičiumi. Geriausi rezultatai pasireiškia transplantacijai 3 × 10 ⁷ / kg, o kaulų čiulpai - 2 × 10 ⁸ / kg. Koordinavimo centrų duomenimis, 2000 m. Pabaigoje pasaulyje buvo pagaminti 1200 nugaros kraujo kūnelių transplantacijos, daugiausia iš giminaičių donorų (83%). Akivaizdu, kad virkštelės kraujas turėtų būti laikomas kaulų čiulpų alternatyva transplantacijai pacientams, sergantiems hemoblastozėmis.

Tačiau, naujagimių gamta Cordova šaltinis kraujodaros audinio skatinant dėl funkcinių savybių jo GCW akivaizdoje. Tačiau tik klinikinė patirtis gali duoti į tam iš virkštelės kraujo mėginį suaugusiųjų kraujodaros tirpinti gavėjo su aplazija kraujodaros pakankamumo klausimą. Transplantacija smegenų kraujo kūnelių yra naudojamas gydant daugelio ligų naviko ir ne-naviko pobūdžio: leukemijos ir su tuo mielodisplazijos sindromų, ne Hodžkino limfoma, ir neuroblastoma, aplastinės anemijos, įgimta Fanconi anemija ir deimanto Black ventiliatorius, trūkumas leukocitų adhezijos, Barr sindromo, Gunther'is liga Harlera sindromo, talasemija .

Dėmesys ir atskiri moksliniai tyrimai nusipelno imunologinių kraujo formuojančių virkštelės kraujo ląstelių transplantacijos aspektų. Jis parodė, kad į transplantacijos virkštelės kraujo kamienines ląsteles iš donorų su daline HLA-atitiko transplantacijos rezultatų atveju yra gana patenkinama, kad, pasak autorių, nurodant mažesnę imunoreaktyvumo virkštelės kraujo, nei kaulų čiulpuose.

Išsamus tyrimas ląstelių sudėties virkštelės kraujo parodė savybes tiek fenotipo spektro ląsteles nuo imuninės sistemos ir jų funkcinio aktyvumo, leidžianti virkštelės kraujo apsvarstyti kaip HSCs šaltinį su santykinai maža rizika reakcijos "transplantato prieš šeimininką". Papildomos funkcijos Funkcijų nebrandumo imunitetą virkštelės kraujo ląstelės turi būti pažymėti disbalansą citokinų gamybą ir į jautrumo sumažėjimą į citokinų nauju reglamentu imuninio atsako. Dėl to susidarantis citotoksinių limfocitų aktyvumo slopinimas yra veiksnys, skatinantis imunologinės tolerancijos transplantacijai kraujodaros audiniuose. Daugelyje virkštelės kraujo limfocitų populiacijos, o ne į periferinį kraują ir kaulų čiulpuose nuo suaugusiųjų donorų, dominuoja neaktyvius, nesubrendusių ląstelių ir slopinančias ląsteles. Tai rodo sumažėjusį T limfocitų virkštelės kiekį imuniniam atsakui. Svarbi bruožų kraujo kūnelių monocitų populiacijos savybė yra mažai funkciškai visiškų ir aktyvių antigeną pateikiančių ląstelių kiekis.

Viena vertus, mažai brandą efektorinE ląstelių imuninės sistemos į virkštelės kraujo rodmenis tęsiasi iki jo naudojimo klinikoje, nes šios savybės leidžia į imuninės konflikto Donoro ir recipiento ląstelių intensyvumo sumažėjimą. Bet, kita vertus, mes žinome, kad koreliacijos tarp reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" liga "ir transplantacijos priešvėžiniai poveikio, ty į" transplantato prieš leukemiją "plėtros poveikio laipsnį egzistavimą. Atsižvelgiant į tai, buvo atliktas tyrimas dėl navikų virškinimo kraujo ląstelių antitumorinio citotoksiškumo. Rezultatai rodo, kad, nepaisant tikrai susilpnėjusi imuninė atsako virkštelės kraujo ląstelių antigeninei stimuliacijos, aktyvintomis pirmoje vietoje yra NK ląstelė ir killeropodobnymi ląstelės, kurios aktyviai dalyvauja įgyvendinimo priešnavikinis citotoksiškumo mechanizmus. Be to, bambagyslės kraujo limfocitų subpopuliacijų buvo rasta su fenotipo CD16 + CD56 + ir CD16 "TCRa / p +. Manoma, kad šios ląstelės yra aktyviojo forma įgyvendinti reakciją" transplantanto prieš Leukemija ".

Tuo Onkologijos instituto medicinos mokslų akademijos Ukrainos šaltyje kraujodaros ląstelės iš virkštelės kraujo buvo skiriami vėžiu sergančių pacientų nuolat hipoplazija kraujodaros Dėl chemoterapijos ir radioterapijos. Šiems pacientams, transplantacija kraujodaros kamieninių ląstelių smegenų kraujo veiksmingai atkurta kraujo priespaudą, kaip matyti iš nuolatinio aukščio brandžių suformuotų elementų periferiniame kraujyje, taip pat kaip į rodiklių padidėjimo apibūdinančių ląstelių ir humoralinio imuniteto būklę. Stabilumas repopulyatsionnogo įsigalioja po transplantacijos kraujodaros virkštelės kraujo ląstelių leidžia toliau radiacijos ir chemoterapijos, nenutraukiant gydymo. Yra įrodymų, kad didesnis veiksmingumas alotransplanto kamieninių ląstelių virkštelės kraujo vėžiu sergantiems pacientams: metinis rizikos pasikartojimo jų vartojimą naviko buvo 25%, lyginant su 40% pacientų, kurių persodinto alogeninių kaulų čiulpų genų.

Iš veiksmų šaltyje virkštelės kraujo kamieninės ląstelės mechanizmas turėtų būti laikomas tam humoralinį stimuliacijos kraujodaros gavėjų sukelia unikalią galimybę naujagimių ląstelių autokrining gamybą kraujodaros augimo faktoriais, taip pat laikinojo prigijimą donorų ląsteles pasekmė (kaip patvirtinimą, rezultatas - gerokai padidėjo į periferinio kraujo vaisiaus hemoglobino gavėjo 7-15 turinį -oji dieną po kraujo perpylimo, palyginti su pradiniu). Nebuvimas gavėjų bambagyslės kraujo po perpylimo reakcijų - rezultatas jos santykiniu tolerancijos imuninių ląstelių, taip pat patikimumo kriterijų, dėl kurio kriosaugojamų biologinės medžiagos naudingumą.

Kamieninių ląstelių T limfocitų žudikas laidas kraujo gali aktyvavimo pagal egzogeninės citokinų stimuliacijos įtakos, kuri yra naudojama kurti naujus ex vivo ir in vivo metodus indukuoti anti-vėžinių citotoksinis limfoidinės ląstelės tolesniam transplantacijos imunoterapijos. Be to, "Niewyrobienie" iš bambos kraujo imuninių ląstelių genomo leidžia jų naudojimo didinant priešvėžiniai aktyvumą molekulinės modeliavimas.

Šiandien virkštelės kraujas plačiai naudojamas pediatrinėje hematologijoje. Vaikams, sergantiems ūmine leukemija alotransplantacija iš kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės kraujo, palyginti su kaulų čiulpų alotransplantatų, žymiai sumažina reakcijos atvejų "transplantanto prieš šeimininką". Tačiau pažymėtina, per ilgą laikotarpį neutropenija ir trombocitopenija, ir, deja, aukštesnio lygio 100 dienų mirštamumo po transplantacijos. Ilgesnis padengimo laikotarpis periferinėse kraujo granuliocitų ir trombocitų gali būti dėl nepakankamo diferencijavimo atskirų subpopuliacijų CD34 teigiamų ląstelių bambagyslės kraujo, kaip matyti iš žemo lygio absorbcijos radioaktyviųjų Rodamininių ir žemos raiškos CD38 antigenais jų paviršiaus.

Tuo pačiu metu, kraujodaros kamieninių ląstelių bambos kraujo suaugusiems pacientams, atliekamų dėl to, kad tiek suderinamą nesusijusiam kaulų čiulpų donoro stokos, taip pat galimybes sutelkti autologinė horizontaliąją socialinę sąlygą transplantacija parodė aukštą metinį atsinaujinusį išgyvenimas be jaunesniems nei 30 metų pacientams (73%) , Plėtimosi gavėjas amžiaus intervalas (18-46 metų) sumažėjo išgyvenimą iki 53%.

Kiekybinė analizė ląstelių su fenotipas CD34 + kaulų čiulpų ir virkštelės kraujo parodė didesnį (3,5 karto), jų turinį kaulų čiulpuose, bet virkštelės kraujo parodė reikšmingą vyrauja ląstelių su fenotipo profilis CD34 + ŽLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi žymekliai CD34 + HLA-DR daugintis daugiau nei aktyvus ląstelių, turinčių imunoprofilį CD34 + HLA-DR +, kaip patvirtinta eksperimentinių tyrimų nuo ilgalaikio kultūros kraujodaros ląstelių augimą in vitro. Primityvieji mobilieji protėviais su fenotipas CD34 + CD38 esančius virkštelės kraujo ir kaulų čiulpų, bet virkštelės kraujo ląstelės su persekiotoją nustatyta CD34 + CD38 turi aukštąjį clonogenic veiklą nei kraujodaros ląstelių to paties fenotipo, izoliuotose nuo suaugusiųjų donoro kaulų čiulpuose. Be to, bambagyslės kraujo ląstelės su CD34 + CD38 imunoprofilį bus daugintis reaguojant į stimuliavimą citokinų (IL-3, IL-6, G-CSF) ir daugintis 7 kartus daugiau kolonijų ilgalaikių kultūrų kaip kaulų čiulpų ląstelių.

Virkštelės kraujo kamieninių ląstelių bankai

Kad tinkamai plėtoti naują srityje praktinio medicina - transplantacijos virkštelės kraujo kamienines ląsteles, o taip pat atlikti persodinimo iš kraujodaros kaulų čiulpų kamieninių ląstelių, turite platų tinklą kraujo bankų, kurie jau įsteigti JAV ir Europoje. Viduje esančius virkštelės kraujo bankų tinklus jungia "Netcord" bankų asociacija. Siekiant sukurti tarptautinę asociaciją virkštelės kraujo bankų galimybių lemia tai, kad atlikti nesusiję transplantacijos reikia daug pavyzdžių virkštelės kraujo įvedėte, leidžianti pasirinkti HLA-identiškas donoras. Tik sukurti bankų sistemą, kuriuose kaupiami skirtingų HLA tipų kraujo mėginiai, iš tikrųjų gali išspręsti būtinojo donoro paieškos problemą. Norint, kad tokia nugaros smegenų kraujo bankų sistema būtų sukurta, būtina parengti etikos ir teisinių normų, kurios šiuo metu diskutuojamos tarptautiniu lygmeniu, kūrimą.

Norint sukurti Ukrainos laidų kraujo bankus, būtina parengti keletą nuostatų ir dokumentų.

Visų pirma, šie klausimai yra standartizuoti mėginių ėmimo, frakcionavimo ir užšaldymo metodą, susijusį su virkštelės krauju. Būtina reguliuoti virkštelės kraujo surinkimo taisykles ligoninėse, laikantis medicinos etikos reikalavimus, siekiant nustatyti minimalų kiekį virkštelės kraujo, kuris numato sėkmingą transplantacijos. Tai turėtų būti lyginama ir standartizavimas skirtingais kriterijais kokybės vertinimo ir kraujodaros kamieninių ląstelių, taip pat nėra HLA-spausdinimo metodų ir būdų diagnozuoti genetines ir infekcinių ligų, kurios gali būti perduodamos iš virkštelės kraujo ląstelių infuzija skaičius nustatyti bendruosius atrankos kriterijus sveikiems donorams. Taip pat verta diskutuoti apie atskirų serumo, ląstelių ir DNR, gautų iš nugaros kraujo, saugojimo įrenginių kūrimą.

Būtina organizuoti kompiuterinį tinklo duomenų apie virkštelės kraują ryšį su kaulų čiulpų donorais. Toliau plėtoti ląstelių transplantacijos reikia parengti konkrečius protokolus lyginant rezultatus transplantacijos virkštelės kraujyje ir kaulų čiulpuose iš ŽLA-identiškų gimines, ir nesusiję donorais. Bendraujant su etikos ir teisinių problemų klinikinės naudojimo virkštelės kraujo ląstelių gali padėti standartizuoti dokumentus, įskaitant informuoto sutikimo tėvų, taip pat pranešti apie motinos arba vaiko giminaičiais žymimas genetinių ir / ar infekcinių ligų.

Lemiamas sąlyga ląstelių transplantacijos plėtros Ukrainoje bus nacionalinės programos priėmimas dėl kamieninių ląstelių donorystės ir tarptautinio bendradarbiavimo plėtrai su kitomis šalimis per pasaulį asociacijos donoro kaulų čiulpų (WMDA), Nacionalinis JAV donoro kaulų čiulpų programos (NMDP) ir kitų registrų.

Apibendrinant dar trumpą istoriją kraujodaros kamieninių ląstelių transplantacijos virkštelės kraujo, mes pažymime, kad pirmoji prielaida klinikinės taikymo virkštelės kraujo galimybės, padaryta pradžioje 70-ųjų, buvo patvirtinta 80 metų eksperimentinių tyrimų su gyvūnais rezultatus, o 1988 metais buvo atliktas pirmasis pasaulyje persodinimo iš kraujodaros ląstelių žmogaus virkštelės kraujo, o tada pradėjo kurti pasaulinio tinklo virkštelės kraujo bankai. Po 10 metų sergančių pacientų skaičius transplantuotų kraujodaros ląstelių, virkštelės kraujo arčiau 800. Tarp jų buvo pacientams, sergantiems įvairiomis navikinių ligų (leukemija, limfoma, solidinių navikų) ir ne auglys (įgimtu imunodeficitu, anemija, ligų, susijusių su medžiagų apykaitos sutrikimai) pobūdžio.

Virkštelės kraujyje ankstyvųjų ir pažeistų ląstelių senelių kiekis yra didesnis nei suaugusio periferinio kraujo. Pagal granulocitų-makrofagų kolonijas formuojančių vienetų skaičių ir jų proliferacinį potencialą, virkštelės kraujas gerokai viršija suaugusiųjų periferinį kraują net ir po augimo faktorių įvedimo. Ilgalaikėse ląstelių kultūrose in vitro buvo didesnis proliferacinis virškinimo trakto kraujo ląstelių aktyvumas ir gyvybingumas, negu kaulų čiulpų ląstelės. Kritiniai momentai iš virkštelės kraujo kamieninių ląstelių transplantacija yra kraujodaros potencialūs skaičius ir branduolį ląstelės, iš citomegalo viruso infekcijos, HLA-suderinama donoro ir recipiento, kūno svorio ir amžiaus paciento buvimą.

Tačiau transplantacija virkštelės kraujo kamieninės ląstelės turėtų būti laikomas alternatyva kaulų čiulpų transplantacijos dėl sunkių kraujo ligoms gydyti, ypač vaikams. Klinikiniai problemos transplantacijos virkštelės kraujo ląstelių palaipsniui išspręsti - yra jau gana efektyvūs imčių metodai, atskyrimas ir kriogeninis konservavimas iš virkštelės kraujo ląstelių, jeigu sąlygas virkštelės kraujo bankų formavimas, bandymo metodai pagerėjo branduolius turinčioms ląstelėms. Optimalus atskyrimas per didelio masto ruošinių virkštelės kraujo kamieninių kraujodaros ląstelių bankų įsteigimo turėtų būti laikomas 3% tirpalo želatinos ir 6% hidroksietil krakmolo tirpalo.

Perehrestenko p et al (2001) teisingai pažymi, kad transplantacija kraujo kamieninėmis ląstelėmis turėtų imtis savo teisėtą vietą sudėtingų terapinių priemonių įveikti kraujodaros įvairios kilmės depresija GSK, virkštelės kraujo skiriasi reikšmingų privalumų, tarp kurių svarbus yra santykinis paprastumas derliaus nuėmimo, nėra jokios rizikos, kad donoro, mažos taršos naujagimių ląstelių virusų ir santykinai nebrangiai transplantacijos. Kai kurie autoriai siūlo, kad virkštelės kraujo ląstelių transplantacijos rečiau nei kaulų čiulpų ląstelių lydi komplikacijų, susijusių su "transplantanto prieš šeimininką" reakcija, kuri yra dėl, jų nuomone, silpna išraiška virkštelės kraujo ląstelių ŽLA-DR antigenų ir jų nebrandumą. Vis dėlto, pagrindinis populiacija branduolį ląstelių bambagyslės kraujo yra T-limfocitai (SDZ-teigiamos ląstelės), kurių kiekis yra apie 50%, kuris yra 20% mažiau nei periferiniame kraujyje suaugusiųjų, bet fenotipinės skirtumai subpopuliacijų T-ląstelių iš šių šaltiniai yra nereikšmingas.

Tarp veiksnių, kurie tiesiogiai įtakos kamieninių ląstelių transplantacijos virkštelės kraujo išlikimą, turėtume atkreipti dėmesį į pacientų (geriausi rezultatai matomi metų iki 5 metų gavėjams), anksti diagnozuoti ligą amžių ir tokia leukemijos forma (efektyvumas yra žymiai didesnis ūmine leukemija). Labai svarbu yra branduolių nugaros smegenų kraujo ląstelių dozė, taip pat jų HLA suderinamumas su recipientu. Tai nėra atsitiktinumas, analizė klinikinį virkštelės kraujo transplantacija GSK Onkologijos ir Hematologijos rodo geriausius rezultatus gydymui naudojant susijusius persodinimą: vienerių metų išgyvenimo be ligos šiuo atveju siekia 63%, o Nesusijusio transplantacijos - tik 29%.

Taigi, daug kamieninių ląstelių virkštelės kraujo ir aukštos repopulyatsionnaya gebėjimas naujagimių kraujodaros kamieninių ląstelių buvimas juos tinkamas alogeninių transplantacijos pacientams, sergantiems piktybinių kraujo ligų. Tačiau atkreipkite dėmesį, kad kraujodaros rekapituliacija po transplantacijos kraujodaros kamieninių ląstelių virkštelės kraujo "yra ištemptas laike": atkurti turinį periferinio kraujo neutrofilų paprastai įvyksta link 6 savaitės pabaigoje ir trombocitopenija reiškinys išnyksta, paprastai po 6 mėnesių. Be to, nesubrendusių kraujo formavimo ląstelės virkštelės kraujo neatmeta imunologinį konfliktą: Rimtas kursas ūminės ir lėtinės reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" pastebėtas atitinkamai 23 ir 25% gavėjų. Ūminės leukemijos reabsorbcijos iki pirmųjų metų pabaigos po nugaros smegenų kraujo ląstelių persodinimo pasireiškia 26% atvejų.

[10], [11]