Ląstelių transplantacijos apribojimai, pavojai ir komplikacijos

Plastiko-regeneracinės medicinos remiasi klinikoje ir toti- savybės pliuripotencinių embrioninių kamieninių ląstelių ir kamieninių realizavimo, leidžiant in vitro ir in vivo sukurti iš anksto nustatytą ląstelių linijas pakartotinos populiacijos pažeistus audinius ir organus žmogaus pacientui.

Nekyla abejonių dėl realios galimybės naudoti žmogaus embrionines kamienines ir kamienines ląsteles galutinių audinių (vadinamųjų suaugusių kamieninių ląstelių) terapiniais tikslais. Tačiau ekspertai Valstybinėse ir medicinos akademijose JAV (JAV) rekomenduoja išsamiau ištirti kamieninių ląstelių savybes eksperimentuose tinkamus biologinius modelius ir objektyviai įvertinti visas transplantacijos pasekmes ir tik tada panaudoti kamienines ląsteles klinikoje.

Nustatyta, kad kamieninės ląstelės yra visų trijų embrioninių lapelių audinių sudedamųjų dalių dalis. Kamieninės ląstelės randamos tinklainėje, ragenos, odos, epidermio, kaulų čiulpuose ir periferiniame kraujyje, į laivų, danties minkštimas, inkstų, virškinamojo trakto, kasos ir kepenų epitelis. Remiantis šiuolaikiniais metodais įrodyta, kad kamieninės nervų ląstelės yra lokalizuotos suaugusiųjų smegenyse ir nugaros smegenyse. Šie sensacingi faktai pritraukė ypatingą dėmesį mokslininkų ir žiniasklaidos, kaip neuronų smegenyse buvo klasikinis pavyzdys, statinio ląstelių populiacijos, kurios negali būti atkurtos. Abu jie ankstyvuoju ir vėlyvuoju laikotarpiai ontogenezėje dėl nervinių kamieninių ląstelių žmogaus ir gyvūnų smegenų generuojamas neuronų Astrocitas ir oligodendrocytes (Kamieninės ląstelės: mokslo pažanga ir ateities mokslinių tyrimų kryptys Šalis Inst, Sveikatos JAV ..).

Tačiau normaliomis sąlygomis galutinių audinių kamieninių ląstelių plastiškumas nėra. Norint realizuoti galutinių audinių kamieninių ląstelių plastikinį potencialą, jie turi būti izoliuoti ir tada kultivuoti terpėje su citokinais (LIF, EGF, FGF). Be to, kamieninių ląstelių dariniai sėkmingai išgyvena tik tada, kai persodinami į gyvūnų kūną su depresine imunine sistema (γ spinduliuotė, citostatika, busulfanas ir kt.). Iki šiol nebuvo jokių įtikinamų įrodymų, kad gyvūnai, kurie nebuvo apšvitinti ar kitaip veikiami gilios imuninės sistemos slopinimo, kamieninių ląstelių plastiškumas.

Esant tokioms aplinkybėms, pavojingų potencijos PGCs pasireiškia pirmiausia jų negimdinio transplantacijos srityje - poodinės injekcijos ESK imunodeficitu peles injekcijos vietoje susiformavo teratokarcinoma. Be to, žmogaus embriono vystymosi dažnio chromosomų anomalijos nei embriogenezės gyvūnams metu. Blastocistos stadijoje tik 20-25% žmogaus embrionų yra sudarytas iš ląstelių su normaliu kariotipu, ir didžioji dauguma pradžioje žmogaus embrionų, gautų po apvaisinimo in vitro, chromosomų mosaicism aptikta chaotišką ir labai dažnai skaitmeniniais ir struktūrinius pakitimus.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7]

Naudingas kamieninių ląstelių poveikis

Preliminarūs klinikinių tyrimų rezultatai patvirtina naudingą kamieninių ląstelių poveikį pacientui, tačiau kol kas nėra informacijos apie ilgalaikes ląstelių transplantacijos pasekmes. Literatūroje, iš pradžių dominuoja pranešimų apie teigiamus rezultatus transplantacijos čiulpų fragmentų embrionų Parkinsono liga, bet tada pradėjo pasirodyti duomenis atimama veiksmingas gydomąjį poveikį embriono ar vaisiaus nervinio audinio persodinto į pacientų smegenys.

Atsižvelgiant į XX amžiaus viduryje kraujodaros restauravimo pirmą kartą buvo atrastas mirtinai apšvitinto gyvūnų veną perpilant kaulų čiulpų ląstelių, ir 1969 amerikiečių tyrinėtojas D. Tomas atliko pirmąjį kaulų čiulpų transplantacijos vyro. Trūksta žinių apie imunologinių nesuderinamumas kaulų čiulpų donoro mechanizmų ir gavėjo, o sukelia didelio mirtingumo dėl dažnų neprizhivleniya transplantato ir plėtros reakcijos "transplantato prieš šeimininką". Iš pagrindinių histosuderinamumo kompleksas, kuris yra sudarytas iš žmogaus leukocitų antigeno (HBA), ir tobulinimo metodus rašyti įmanoma gerokai padidinti išgyvenamumas po kaulų čiulpų transplantacijos, dėl kurių buvo plačiai šio gydymo į Onkologijos ir Hematologijos metodo atradimas. Po dešimties metų, buvo atliktas pirmasis transplantacija kraujodaros kamieninių ląstelių (HSCs), gauti iš periferinio kraujo leukaferezės. 1988 metais Prancūzijoje vaiko su Fankoni anemijai gydyti kaip HSCs šaltinio, kurį ji buvo pirmą kartą panaudota virkštelės kraujo, ir 2000 metų pabaigoje spaudoje ėmė atsirasti apie HSCs gebėjimą atskirti į ląsteles įvairių audinių tipų, kurie potencialiai plečia savo klinikinę taikymo sritį. Tačiau, jis buvo, kad transplantacijai medžiaga, kartu su GSK yra pakankamas skaičius skiriasi pobūdžio ir savybių priemaišų ne-kraujodaros ląstelių. Atsižvelgiant į tai, plėtojami skiepų valymo būdai ir jo ląstelių grynumo vertinimo kriterijai. Ypač naudojamas teigiamas CD34 + ląstelių imuninis sekimas, kuris leidžia izoliuoti HSC naudojant monokloninius antikūnus.

[8], [9], [10], [11], [12]

Kamieninių ląstelių terapijos komplikacijos

Kaulų čiulpų transplantacijos komplikacijos dažniausiai yra hematologinės ir yra susijusios su ilgesniu jatrogeninės pancitopenijos laikotarpiu. Dažniausios infekcijos yra anemija, anemija ir kraujavimas. Šiuo atžvilgiu labai svarbu, kaip rasti optimalų atrankos režimo, tvarkymą ir saugojimą kaulų čiulpų maksimaliai išsaugoti kamieninių ląstelių, kurios teikia greitą ir stabilų atsigavimą kraujodaros. Kvalifikuojant transplantato priimtą įvertinti šiuos parametrus ji yra dabar: iš vienabranduolių ir / arba branduolį ląstelių skaičius, ir kolonijas sudarančių vienetų turinio SB34-teigiamos ląstelės. Deja, šie rodikliai tik netiesiogiai įvertina tikrojo kamieninių ląstelių persodinimo populiacijos hematopoetinį gebėjimą. Šiuo metu yra absoliučiai tikslūs parametrai, lemiantys dėl ilgalaikio atsigavimo kraujodaros pacientams net su autologinė kaulų čiulpų transplantacija transplantato pakankamumą. Bendrųjų kriterijų kūrimas yra labai sunkus dėl griežtų perdirbimo stan dartų, kriokozės išsaugojimo ir skiepų testų stokos. Be to, būtina atsižvelgti į veiksnių įvairovę, kurie įtakoja kiekvieno konkretaus paciento sėkmingo kraujospūdžio atkūrimo parametrus. Be autologinė kaulų čiulpų transplantacija svarbiausia iš jų yra iš anksto režimų skaičius, ypač kondicionierius režimas, iš ligos, kuri yra gaminama iš kaulų čiulpų surinkimo schemos taikymo Kolonijas stimuliuojantys faktoriai į po transplantacijos laikotarpiu laikotarpis. Be to, nereikėtų pamiršti, kad chemoterapija prieš vaisiaus skiepijimą gali turėti neigiamą poveikį kaulų čiulpų kamieninėms ląstelėms.

Su alogenine kaulų čiulpų transplantacija žymiai padidėja sunkių toksinių komplikacijų dažnis. Šiuo požiūriu susidomėjimą kelia statistiniai duomenys apie alogeninių kaulų čiulpų transplantaciją į tabasemiją. Europos kaulų čiulpų transplantacijos grupės ataskaitose apie 800 kaulų čiulpų transplantacijų buvo registruojami pacientams, kuriems yra didelis talasemija. Alogeninei transplantacija talasemija daugeliu atvejų, atliktų nuo HLA-identiški broliai ir seserys, kuris yra susijęs su sunkių komplikacijų ir aukštojo mirtingumo kamieninių ląstelių medžiagos transplantacijai, susijusios dalies suderinama ar atitiko nesusijusių donorų. Siekiant sumažinti mirtinų infekcinių komplikacijų riziką, pacientai dedami į izoliuotus aseptinius dėžes su laminariu oro srautu, gaunamos mažos arba abstrakčios dietos. Dėl bakterijų sankaupų iš žarnyno per os skiriamos ne rezorbcinės antibiotikų formos, priešgrybeliniai vaistai. Siekiant užkirsti kelią į veną amfotericinas B. Prevencija sisteminėmis infekcijomis fiksuoto amikacinu ir ceftazidimo, kurie paskirti dieną prieš transplantaciją, o toliau gydytis vykdyti pacientų. Visi kraujo preparatai prieš apšvitinimą apšvitinami 30 Gy dozėje. Parenterinė mityba transplantacijos metu yra būtina sąlyga ir nedelsiant pradedama mažinti natūralų maisto vartojimą.

Komplikacijų, susijusių su didelio toksiškumo imuninę sistemą slopinančių vaistų, kurie dažnai sukelia pykinimą, vėmimą ir gleivinės uždegimas, inkstų pažeidimo ir intersticinė pneumonija skaičius. Viena iš sunkiausių chemoterapijos komplikacijų yra venų okliuzinė kepenų liga, dėl kurios mirė anksčiau po transplantacijos. Tarp rizikos veiksnių venų trombozė portalo sistemos kepenyse turi būti pažymėta paciento amžiaus, buvimas hepatito ir kepenų fibroze ir laikydami imunosupresinis gydymas po kaulų čiulpų transplantacijos. Venookklyuzionnaya liga yra ypač pavojingas talasemija, kuris yra lydimas hemosiderosis kepenų fibroze ir hepatito - dažnai palydovai transformuoti fusional terapija. Venų trombozė portalo sistemos kepenyse vystosi per 1-2 savaites po transplantacijos ir yra būdingas spartus kraujo bilirubino ir transaminazių, palaipsniui hepatomegalija, ascitas, encefalopatija, ir skausmas viršutinėje pilvo. Histologiškai autopsinės apibrėžta endotelio pažeidimo, subendothelial hemoragijos, pažeidimų tsentrolobulyarnyh hepatocitų, tromboze obstrukcija kepenų venulių ir centrinė venų. Pacientams, sergantiems talazemija, buvo aprašyti mirtini širdies sustojimo atvejai, susiję su toksinio poveikio citostatikams.

Ruošiantis transplantacijai, ciklofosfamidas ir busulfanas dažnai sukelia toksinį hemoraginį cistitą su patologiniais pokyčiais uroepitelio ląstelėse. Naudojimas ciklosporino A kaulų čiulpų transplantacijos yra dažnai lydi poveikio inkstams bei neurotoksiškumas, hipertenzinės sindromo, skysčių susilaikymo ir citolize hepatocitų. Lytinės ir reprodukcinės funkcijos pažeidimas dažniau pastebimas moterims. Jaunuosiuose vaikuose po transplantacijos paprastai nepasireiškia brendimas, tačiau vyresniems vaikams genitalijų sferos vystymosi patologija gali būti labai rimta - iki sterilumo. Sąveika, tiesiogiai susijusi su pačia transplantacija, apima atogrąžų alogeninių kaulų čiulpų ląsteles, nesuderinamumą ABO sistemoje, ūminę ir lėtinę "transplantato prieš šeimininką" reakcijos formas.

Į paciento po transplantacijos ABO-nesuderinama kaulų čiulpų idioagglutinin tipo "host prieš donoro ABO" pagaminto per 330-605 dienų po transplantacijos, kuri gali pailgėti hemolizės ir aštriu padidėjimo kraujo perpylimo poreikį. Sakė komplikacija yra užkirstas kelias transfuzija, eritrocitų grupių tik 0. Po transplantacijos keleto pacientų, autoimuninės neutropenijos, trombocitopenijos, pancitopenija, arba, korekcijos kuris turi būti atliekamas splenektomijos.

Be 35-40% gavėjų ūminės reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" plėtoja per 100 dienų po alogeninių hemoglobino identiški kaulų čiulpų transplantacijos. Odos pažeidimų, kepenų ir žarnyno laipsnis skiriasi nuo išbėrimas, hiperbilirubinemiją viduriavimas ir lengvas į odos deskvamaciją žarnų nepraeinamumas, ir ūminio kepenų nepakankamumo. Pacientams, sergantiems talasemija dažnio ūminės reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" I kiek po kaulų čiulpų transplantacijos yra 75%, II ir didesnis mastas - 11-53%. Lėtinė reakcija "transplantato prieš šeimininką", kaip sisteminės dauginio organų sindromo paprastai susidaro per 100-500 dienų po transplantacijos alogeninių kaulų čiulpų 30-50% pacientų. Susilpnėja oda, burnos džiūvimas, kepenys, akys, stemplė ir viršutiniai kvėpavimo takai. Atskirti ribotą formą lėtinio reakcijos "transplantato prieš šeimininką", kai paveikta oda ir / arba kepenų, ir plačiai, generalizuotos odos pažeidimai, kai ji derinama su lėtiniu agresyvaus hepatito, akių ligos, seilių liaukų arba bet kuriam kitam organui. Mirties priežastis dažnai yra infekcinės komplikacijos, kurias sukelia sunkus imunodeficitas. Be talasemija lėtinio lengvos formos reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" buvo nustatyta 12%, vidutinio sunkumo - 3%, o sunkus - turi 0.9% gavėjų ŽLA-suderinamą alogeninės kaulų čiulpuose. Rimtas komplikacija kaulų čiulpų transplantacijos yra transplantato atmetimas, kuris išsivysto per 50-130 dienų po operacijos. Atmetimo dažnis priklauso nuo kondicionavimo režimo. Visų pirma, per vien metotreksatu preparato pacientams, sergantiems talasemija apdorojimo, atmetimas kaulų čiulpų transplantato yra stebimas 26% atvejų, deriniai metotreksato kartu su ciklosporinu A - 9%, ir, kai priskiriant tik ciklosporinas A - 8% atvejų (Haziyev tt ., 1995).

Infekcinės komplikacijos po kaulų čiulpų transplantacijos sukelia virusus, bakterijas ir grybus. Jų plėtra yra susijusi su gilia neutropenija, kuri yra sukelta per chemoterapijos kondicionavimo, citostatikai nugalėti gleivinės kliūtims ir reakcijos "transplantanto prieš šeimininką". Atsižvelgiant į vystymosi laiką, išskiriamos trys infekcinių komplikacijų fazės. Pirmajame etape (kuriant pirmąjį mėnesį po transplantacijos) dominuoja žalos gleivinės barjerą ir neutropenija, dažnai lydi virusinių infekcijų (herpes, Epstein-Barr virusas, citomegaloviruso, vėjaraupių), taip pat sukeltų infekcijų grampolozhi - uždegiminių ir gramneigiamų bakterijų, Candida grybelių , aspergilomos. Pradžioje po transplantacijos (antrasis ir trečiasis mėnesių po transplantacijos) yra skaudžiausias citomegalo infekcija, kuri dažnai veda prie mirties pacientų antrojo etapo infekcija. Talasemija citomegalo infekcija po transplantacijos kaulų čiulpuose pasireiškia 1.7-4.4% gavėjų. Trečiasis etapas yra stebimas pabaigoje po transplantacijos (trys mėnesiai po operacijos) ir pasižymi sunkia kombinuoto imunodeficito. Šis laikotarpis paprastai randama sukeltoms infekcinėms vėjaraupių, Streptococcus, Pneumocystis Carini Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, ir hepatotropic virusų. Talasemija mirtingumo pacientams po kaulų čiulpų transplantacijos yra susijęs su bakterijų ir grybelių sepsis, idiopatinės intersticinės pneumonijos ir citomegaloviruso, ūminio respiracinio distreso sindromo, ūmaus širdies nepakankamumo, širdies tamponada, smegenų hemoragija, venookklyuzionnoy kepenų ligų ir ūminio reakcijos "transplantato prieš šeimininką".

Šiuo metu padaryta tam tikra pažanga kuriant metodus, skirtus iš kaulų čiulpuose išskirti tik gryną kamieninių kraujo kūnelių populiaciją. Pagerėjo vaisiaus kraujo iš juodojo virvių gavimo technika ir sukurta metodų kraują formuojančių ląstelių išskyrimui iš virkštelės kraujo. Moksliniame spaudoje yra pranešimų, kad kada kultivuojamos terpėje su citokinais, kraujodaros kamieninės ląstelės gali daugintis. Naudojant specialiai suprojektuotus biologinius reaktorius, skirtus HSC plėtrai, žymiai padidėja kaulų čiulpų, periferinių ar virkštelės kraujo ląstelių, išskirtų iš kamieninių kraujo ląstelių, biomasė. HSC ekspansijos galimybė yra svarbus klinikinės ląstelių transplantacijos ramstis.

Tačiau prieš HSC reprodukciją in vitro būtina izoliuoti homogeninę hematopoetinių kamieninių ląstelių populiaciją. Tai dažniausiai pasiekiama naudojant žymeklius, leidžianti selektyviai pažymėti HSC monokloninius antikūnus kovalentiškai prijungta prie magnetinio arba fluorescentinį žymenį, ir pasirinkti juos su atitinkama ląstelių rūšiavimo. Tuo pačiu metu nepavyko išspręsti hematopoetinių kamieninių ląstelių fenotipinių savybių. A. Petrenko. V. Hryschenko (2003), kaip kandidatai GSK gydoma ląsteles, kurios metu ant CD34, AC133 ir Thyl antigenų ir ne CD38, HLA-DR ir kitų žymenų diferenciacijos (ląstelių su fenotipas CD34 + Liir) paviršiaus. Linijinės diferenciacijos žymenimis (linijos? Lin) apima glycophorin A (VPS), CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20 ir (Muench, 2001). Laikomas perspektyvus transplantacijos / mažas ląsteles su fenotipo CD34 + CD45RalüW CD71low, taip pat CD34 + Thyl + CD38low / c-KIT.

Problema yra tai, kad HSC kiekis yra pakankamas veiksmingai transplantacijai. Šiuo metu kamieninių kraujo formuojančių ląstelių šaltinis yra kaulų čiulpai, periferiniai ir virkštelės kraujas, taip pat embrioninės kepenys. Veislės hematopoetinių ląstelių išsiplėtimas yra pasiekiamas juos kultivuojant esant endoteliocitams ir hematopoetiniams augimo veiksniams. Įvairiuose protokoluose naudojami mieloproteinai, SCF, eritropoetinas, insulino tipo augimo faktoriai, kortikosteroidai ir estrogenai, skatinant HSC proliferaciją. Kai in vitro naudojami citokinų deriniai, žymiai padidėjusi HSC pūslelinė gali būti pasiekta, kai jų išsiskyrimo didžiausia koncentracija yra antrosios savaitės pabaigoje.

Tradiciškai HSC virkštelės kraujas dažniausiai naudojamas hemoblastozėse. Tačiau minimali hematopoetinių ląstelių dozė, reikalinga sėkmingai virkštelės kraujo ląstelių persodinimui, yra 3,7 x 10 ⁷ branduolio ląstelės 1 kg recipiento kūno svorio. Naudojant mažesnį HSC kiekį, reikšmingai padidėja transplantato nepakankamumo ir ligos atkryčio rizika. Todėl kraujo formuojančių virkštelės kraujo ląstelių transplantacija daugiausia naudojama vaistų hemoblastozės gydymui.

Deja, vis dar nėra standartas tuščias ir standartizuoti protokolus klinikinis naudojimas virkštelės kraujo kraujodaros ląsteles. Todėl patys kamieninių ląstelių virkštelės kraujo nėra teisiškai pripažįstami kaip kraujodaros kamieninių ląstelių transplantacijos šaltinį. Be to, nėra jokių etikos ar teisės normas, reglamentuojančias veiklą ir organizavimą bankų bambos krovb, kurie yra prieinami užsienyje. Tuo tarpu saugiam persodinimui reikia atidžiai stebėti visus virkštelės kraujo mėginius. Prieš imant kraujo mėginį iš nėščios moters, turi būti gautas jo sutikimas. Kiekviena nėščia turi būti nagrinėjamas HBsAg vežimui, antikūnų prieš hepatito C viruso, ŽIV, ir sifilio. Kiekvieną virkštelės kraujo mėginį reikėtų reguliariai tikrinti dėl branduolių ląstelių skaičiaus, CD34 + ir kolonijų formavimo gebėjimų. Be to, HbA atliekami rašyti, kraujo grupės ABO ir savo narystę Rh faktorius. Bandymo procedūros yra reikalingos derlių apie bakteriologinį sterilumo, serologiniams tyrimams dėl ŽIV-1 ir ŽIV-2 infekcijos, HBsAg, hepatito C virusu, citomegalo viruso infekcijos, ntly ntly-1 ir II, sifilis, toksoplazmozės. Be to, polimerazės grandininė reakcija yra atliekama citomegaloviruso ir ŽIV infekcijos nustatymui. Atrodo, būtų tikslinga papildyti protokolai testavimo virkštelės kraujo HSCs analizę, siekdama nustatyti tokias genetinių ligų, tokių kaip talasemija ir pjautuvo pavidalo ląstelių anemija, adenozindeaminazės trūkumas, agamaglobulinemija Bruton, ligų Harlera ir Fonai.

Kituose transplantacijos rengimo etapuose kyla klausimas dėl GSK išsaugojimo. Labiausiai pavojingas ląstelių gyvybingumui jų paruošimo metu yra užšaldymo ir atšildymo procedūros. Sumaišius hemopoetines ląsteles, didelė jų dalis gali būti sunaikinta dėl kristalų susidarymo. Siekiant sumažinti ląstelių mirties procentą, naudojamos specialios medžiagos - krio apsaugai. Dažniausiai, kaip krioprotektantas, DMSO naudojamas galutinei koncentracijai 10%. Tačiau DMSO atveju ši koncentracija būdinga tiesioginiam citotoksiniam poveikiui, kuris pasireiškia net esant minimaliai ekspozicijai. Sumažintas citotoksinis efektas pasiektas išlaikant griežtas nulio temperatūros Išlaikymo režimas ir reguliavimo atitikties apdorojimo medžiaga metu ir po atšildymo (greitį visų manipuliacijų taikant kelis plovimo procedūras). Nenaudokite DMSO koncentracijos mažiau kaip 5%, nes šiuo atveju kraujo kūnelių masė miršta peršaldymo laikotarpiu.

Raudonųjų kraujo kūnelių priemaišų buvimas suspensijos mišinyje GSK sukelia pavojų susilpninti eritrocitų antigenų nesuderinamumo reakciją. Tuo pačiu metu, eliminavus eritrocitus, hematopoetinių ląstelių praradimas gerokai padidėja. Todėl buvo pasiūlytas nefrakcionuoto GCS atskyrimo metodas. Šiuo atveju, siekiant apsaugoti branduolius turinčių ląsteles nuo žalingo žemos temperatūros, naudojant 10% DMSO tirpalo ir aušinimo pastoviu greičiu (HS / min), kad -80 ° C, o po to ląstelių suspensija buvo užšaldoma skystame azote. Manoma, kad naudojant šią kriokozės techniką vyksta dalinis eritrocitų lizė, todėl kraujo mėginiai nereikalauja frakcionavimo. Prieš transplantaciją ląstelių suspensija atšildoma, išplautas be žmogaus hemoglobino ir DMSO žmogaus albumino ar serumo tirpale. Išsaugojimas kraujodaros kamieninės naudojant šį metodą yra iš tiesų didesnis nei po virkštelės kraujo frakcijas, tačiau komplikacijų perpilant ABO-nesuderinama perpylimo eritrocitų saugomi pavojus.

Sukūrus bankų sistemą, skirtą HSC bandomiems ir HSC pavyzdžiams saugoti, galima išspręsti pirmiau minėtas problemas. Tačiau tam būtina sukurti etikos ir teisines normas, apie kurias vis dar svarstoma. Prieš sukūrus bankų tinklą, būtina patvirtinti keletą nuostatų ir dokumentų, skirtų mėginių ėmimo, frakcionavimo, bandymų ir tipų sudarymo procedūrų standartizavimui bei GCW kriokonservavimui. GSK bankų veiksmingai veikianti privaloma sąlyga yra kompiuterinė bazė, skirta sąsajoms su Pasaulio donorų medulerija asociacijos (WMDA) registrais ir Jungtinių Valstijų nacionaline donorų medulerija programa (NMDP).

Be to, būtina optimizuoti ir standartizuoti HSC ekspansijos in vitro metodus, pirmiausia kraujo kūnelių kraujotaką. HSC virkštelės kraujo dauginimas reikalingas norint padidinti potencialių HLA sistemos suderinamų recipientų skaičių. Dėl mažo virkštelės kraujo kiekio, jo sudėtyje esantis HSC kiekis paprastai neleidžia rekonstruoti kaulų čiulpų suaugusiems pacientams. Tuo pačiu metu, nesusijusių transplantacijų atlikimui, reikia turėti pakankamą skaičių tipinių GSK pavyzdžių (nuo 10 000 iki 1 500 000 vienam gavėjui).

Šlaunikaulio kraujo ląstelių transplantacija nepašalina komplikacijų, susijusių su kaulų čiulpų transplantacija. Analizė parodė, kad virusinės kraujo kamieninių ląstelių transplantacijos atveju sunkios formos ūminės "transplantato prieš šeimininką" reakcijos atsiranda 23%, lėtinės 25% recipientų. Onkohematologinėse pacienėse 26% atvejų pasitaiko ūmaus leukemijos recidyvo per pirmuosius metus po HSC virkštelės kraujo transplantacijos.

Pastaraisiais metais intensyviai vystosi periferinių hematopoetinių kamieninių ląstelių transplantacijos metodai. HSC kiekis periferiniame kraujyje yra toks mažas (yra 1 GSK 100 000 kraujo ląstelių), todėl jų izoliavimas be specialaus paruošimo neturi prasmės. Todėl donorui anksčiau buvo duotas kraujo krešėjimo kraujo krešulių kraujo ląstelių išlaisvinimo vaistų stimuliacijos kursas. Šiuo tikslu naudojami tokie tolimos nekenksmingi vaistai, kaip ciklofosfamidas ir granulocitų kolonijas stimuliuojantis faktorius. Tačiau net ir po HSC mobilizavimo periferiniame kraujyje, jo CD34 + ląstelių kiekis neviršija 1,6%.

HSC mobilizavimui klinikoje dažniausiai naudojamas C-CEC, kuris pasižymi santykinai geru toleravimu, išskyrus beveik reguliarų kaulų skausmo atsiradimą. Reikėtų pažymėti, kad šiuolaikinių kraujo separatorių naudojimas leidžia efektyviai izoliuoti kraujo gimdos kaklelio progenitorius. Tačiau, esant normaliai kraujodaros gauti pakankamą kiekį kraujodaros kamieninių ląstelių, panaši Gebėjimas repopulyativnoy sіl Medullary srutos, būtina atlikti bent šešias gydymo. Kiekvienoje tokioje procedūroje separatorius apdoroja 10-12 litrų kraujo, kuris gali sukelti trombocitopeniją ir leukopeniją. Atskyrimas procedūra apima skyrimą donoro antikoaguliuojantį (natrio citratas), kuris Neatmeta, tačiau, adresų trombocitų aktyvacijos in vitro centrifuguojant. Šie veiksniai sudaro sąlygas infekcinių ir hemoraginių komplikacijų vystymuisi. Kitas metodo trūkumas yra susijęs su dideliu mobilizacijos atsako svyravimu, kuris reikalauja stebėti HSC turinį periferinių kraujo donorystėje, būtiną jų didžiausiam kiekiui nustatyti.

Autologinis HSC transplantacija, priešingai nei alogenezė, visiškai pašalina atmetimo reakcijos vystymąsi. Tačiau reikšmingas trūkumas autologinė transplantacija kraujodaros kamieninių ląstelių, apriboti indikacijas jo elgesio spektrą, yra didelė tikimybė, reinfusion ląstelių leukeminių klonas transplantacijos. Be to, dėl imuninės sistemos poveikio "transplantato prieš naviką" trūkumas žymiai padidina piktybinės kraujo ligos recidyvų dažnumą. Todėl, vienintelis būdas radikaliai panaikinimo klonų kraujodaros neoplazminių ir atkurti normalų polikloninio hematopoezės mielodisplazijos sindromų yra intensyvi chemoterapija su alogeninių HSC transplantacijos.

Bet net ir šiuo atveju gydymas daugeliui hemoblastozių yra skirtas tik pacientų išgyvenimo trukmės didinimui ir jų gyvenimo kokybės gerinimui. Remiantis keliais stambiais tyrimais, ilgalaikis išgyvenamumas be ligų po HSC alotransplantacijos pasiekiamas 40% onkohematologinių pacientų. Naudojant HbA-suderinamą broliuką vartojančias kamienines ląsteles, geriausi rezultatai pasireiškia jauniems pacientams, kuriems ligos istorija buvo nedaug, ląstelių skaičius iki 10% ir palankios citogenetinės savybės. Deja, mirtingumas, susijęs su HSC allotransplantacijos procedūra sergantiems mielodisplazinėmis ligomis, išlieka didelis (daugumoje ataskaitų - apie 40%). 10 metų rezultatai dirbti JAV nacionalinės programos kaulų čiulpų donorystę (510 pacientų amžiaus mediana - 38 metų), rodo, kad liga išgyvenamumas be yra 29% per dvejus metus santykinai maža tikimybė atkryčio (14%). Tačiau mirtingumas, kurį sukelia GSC alotransplantacijos procedūra iš nesusijusio donoro, yra labai didelis ir per dvejų metų laikotarpį pasiekia 54%. Panašūs rezultatai buvo gauti Europos tyrime (118 pacientų, vidutiniškai 24 metai, 2 metų išgyvenamumas be ligos atsinaujinimo 28%, pasikartojimasis 35%, mirštamumas 58%).

Vykdydama intensyvi chemoterapija, po sumažinimo alogeninių kraujodaros ląstelių gemopo- etikos dažnai kyla immunohematology ir perpylimo komplikacijų. Daugeliu atvejų jie susiję su tuo, kad žmogaus kraujo grupės yra paveldimos nepriklausomai nuo MHC molekulių. Todėl, net jei donoras ir recipientas yra suderinami su pagrindiniais HLA antigenais, jų eritrocitai gali turėti skirtingą fenotipą. Skirti "didelis" nesuderinamumo, kai Gyvuoti gavusiame antikūnų prieš antigenų, iš kurio raudonųjų kraujo kūnelių, ir "mažas", kai donoro antikūnai prieš antigenais, raudonųjų kraujo ląstelių recipiento. Yra "didelių" ir "mažų" nesuderinamumų deriniai.

Lyginamojo analizės klinikinio veiksmingumo kaulų čiulpuose ir kraujodaros kamieninių ląstelių bambos kraujo alotransplantatų į piktybinių kraujo ligų rezultatai rodo, kad vaikai alotransplantacija GSK virkštelės kraujo žymiai sumažino reakcijos "transplantanto prieš šeimininką" riziką, bet yra ilgesnis atsigavimo neutrofilų ir trombocitų didesnis 100 dienų po transplantacijos mirtingumo dažnis.

Išanalizavus ankstyvojo mirtingumo priežastis, buvo galima paaiškinti kontraindikacijas, susijusias su GSK alogenine transplantacija, tarp kurių svarbiausios yra:

• teigiamų citomegalovirusinės infekcijos testų gavėjas ar donoras (neatlikus profilaktinio gydymo);
• ūminė spindulinė liga;
• buvimas arba įtariamas buvimas, skirto paciento, mycotic infekcijų (be ankstyvosios prevencijos fungicidai agentų sistemos);
• hemoblastozės, kurių metu pacientai ilgą laiką vartojo citostatiką (dėl staigaus širdies sustojimo ir daugelio organų nepakankamumo tikimybės);
• transplantacija iš HLA neatitinka donorų (be ciklosporino A reakcijos ūminės transplantacijos nuo šeimininko reakcijos prevencijos);
• lėtinis virusinis hepatitas C (dėl didelės venų okliuzinės kepenų ligos pavojaus).

Taigi GSK transplantacija gali sukelti rimtų komplikacijų, kurios dažnai sukelia mirtį. Pradžioje (iki 100 dienų po transplantacijos) laikotarpis tai yra infekcinių komplikacijų, ūmi reakcija "transplantanto prieš šeimininką", transplantanto atmetimas (neprizhivlenie SAK donoras), venookklyuzionnaya kepenų liga, taip pat dėl to, paruošimo režimo toksiškumo, audinių pažeidimas, už kurį aukštos charakteristika rekonstrukcijos greitis (odos, kraujagyslių endotelio, žarnyno epitelio). Komplikacijos pabaigoje po transplantacijos yra lėtinė reakcija "transplantanto prieš šeimininką" pasikartojimo pagrindinės ligos, sulėtėjęs vaikų augimas, sutrikusi reprodukcinei funkcijai ir skydliaukės akių liga.

Neseniai, atsiradus publikacijoms apie kaulų čiulpų ląstelių plastiškumą, atsirado idėja naudoti GSK širdies priepuolių ir kitų ligų gydymui. Nors kai kurie eksperimentai su gyvūnais taip pat patvirtina šią galimybę, reikia patvirtinti išvadas apie kaulų čiulpų ląstelių plastiškumą. Tos mokslininkės, kurios mano, kad žmogaus kaulų čiulpų persodintos ląstelės lengvai transformuojamos į skeleto raumenų, miokardo ar CNS ląsteles, turėtų atsižvelgti į šią aplinkybę. Hipotezė, kad GSK yra natūralus ląstelinis šių organų regeneracijos šaltinis, reikalauja rimtų įrodymų.

Visų pirma, paskelbė pirmuosius rezultatus atvirą atsitiktinių imčių tyrimų Belenkova V. (2003), kurio tikslas - ištirti C-SIS poveikį (ty, mobilizacija autologinio kraujo HSCs) klinikinius, hemodinamikos ir neurohumoralinės statuso pacientams, sergantiems vidutinio sunkumo arba sunkiu lėtiniu širdies nepakankamumu, taip pat jo saugos vertinimą su standartiniu gydymu (AKF inhibitorių, beta adrenoreceptorių blokatoriais, diuretikais, širdies glikozidų). Pirmoji publikacija iš mokslinių tyrimų programos autorių rezultatais dėmesį, kad vienintelis argumentas naudai O-CBP yra iš vieno paciento gydymo rezultatai, kuris gydymo šiuo preparatu metu rasti neginčijamą pagerėjimą visus klinikinius ir hemodinamikos parametrų. Tačiau HSCs mobilizacijos į kraują po regeneracijos pasibaigus infarkto zonoje miokardo teorija nebuvo patvirtinta - net ir tiems pacientams su teigiamais klinikinių dinamikos streso echokardiografija su dobutaminas neatskleidė realią miokardo atsiradimą randas sričių srityje.

Reikia pažymėti, kad iki šiol duomenys, leidžiantys rekomenduoti pakaitinį ląstelių terapiją plačiai paplitusiam įvedimui į kasdienę klinikinę praktiką, yra nepakankamai. Gerai paruošta ir kokybiškai atlikimas klinikinių tyrimų, siekiant nustatyti įvairių variantų regeneracinės ląstelių terapija, į indikacijų ir kontraindikacijų į jį plėtrai, taip pat gaires Kombinuotosios naudojimo regeneracinius ir plastiko terapijos ir paprastųjų chirurginės arba konservatyvaus gydymo efektyvumą. Iki šiol jokio atsakymo į tai, kokios iš kaulų čiulpų ląstelių (kraujodaros kamieninių arba stromos) gyventojų klausimas gali sukelti neuronų ir kardiomiocitų, ir nėra aišku, kokiomis sąlygomis prie to prisidėti in vivo.

Darbas šiose srityse atliekamas daugelyje šalių. Atsižvelgiant į simpoziumą apie ūminį kepenų nepakankamumą JAV Nacionalinių sveikatos institutų tarp perspektyviausių gydymo metodų, kartu su kepenų transplantacijos Apibendrinant, persodinimo pažymėta xenon ar alogenines hepatocitų ir in vitro Bioreaktoriai ryšį su kepenų ląstelių. Yra tiesioginių įrodymų, kad tik sveiki, funkciškai aktyvūs hepatocitai gali veiksmingai palaikyti recipiento kepenis. Dėl izoliuotų hepatocitų klinikinio naudojimo būtina sukurti ląstelių banką, kuris žymiai sumažins laiką tarp ląstelių išleidimo ir jų naudojimo. Labiausiai priimtinas, norint sukurti izoliuotų hepatocitų banką, yra kepenų ląstelių sausojo azoto kreivacinis išsaugojimas. Naudojant tokias ląsteles klinikoje pacientams, kuriems yra ūminis ir lėtinis kepenų nepakankamumas, nustatyta gana didelis terapinis poveikis.

Nepaisant optimistinių ir skatinant rezultatų transplantacijos kepenų ląstelių eksperimente ir klinikoje, vis dar yra daug problemų vis dar toli gražu išspręsta. Tai apima ribotą kiekį tinkamų organų gauti izoliuotų hepatocitų nepakankamai veiksmingas metodus atskyrimas, standartizuotų metodų išsaugant kepenų ląstelių fuzzy supratimą apie reguliavimo augimo ir proliferacijos iš transplantuotų ląstelių mechanizmų trūkumas, tinkamos metodai prigijo vertinimo ar atmetimo alogeninės hepatocitų stoka. Tai taip pat turėtų apimti transplantacijos imuniteto naudojant alogenes ir ksenogenines ląsteles buvimą, nors mažiau nei orthotopic kepenų transplantacijos, tačiau reikalaujant, kad imunosupresantais taikymą, sandarinimo izoliuotas hepatocitų ar specialių apdorojimo fermentų. Transplantacija hepatocitų dažnai sukelia imuninį konfliktų tarp gavėjo ir paramos teikėjo A atmetimo reakcijos, kurios reikalauja, kad citostatikais naudojimą. Vienas šios problemos sprendimas yra naudoti polimerinių mikroporėto žiniasklaidos izoliuoti kepenų ląsteles, kurios bus pagerinti savo išlikimo, nes kapsulė membrana efektyviai apsaugo kepenų ląsteles, nepaisant priimančiosios imunizacija.

Tačiau, ūminio kepenų funkcijos nepakankamumo tokio hepatocitų transplantacija neturi jokio poveikio, nes gana ilgą laiką, reikalingą prigijimą kepenų ląstelių naujoje aplinkoje su prieiga prie žingsnio optimalų veikimą. Galimas apribojimas yra tulžies negimdinio transplantacijos izoliuotų hepatocitų sekrecijos, ir, kai naudojant bioreaktoriai svarbu fiziologinis barjeras veikia rūšių neatitikimą tarp žmogaus baltymų ir baltymų, kurie gamina KSENOGENINIŲ hepatocitų.

Literatūroje yra pranešimų, kad vietos transplantacijos kaulų čiulpų stromos kamieninių ląstelių palengvina veiksmingą ištaisyti kaulų defektų ir kaulų atkūrimą šiuo atveju yra intensyvesnis nei spontaniškai atkuriamuoju regeneraciją. Keliuose Ikiklinikinių tyrimų metu gyvūnų modelių įtikinamai parodė, naudojant transplantacijos kaulų čiulpų stromos ląstelių ortopedija, nors optimizuoti šiuos metodus, net paprasčiausių atvejų reikia toliau dirbti galimybę. Visų pirma, optimalios osteogeninių stromos ląstelių išplitimo sąlygos ex vivo dar nebuvo nustatytos, jų idealiojo nešiklio (matricos) struktūra ir sudėtis lieka neapdorota. Mažiausias ląstelių kiekis, reikalingas didžiulėms kaulų regeneravimui, nenustatytas.

Tai įrodė, kad mezenchiminių kamieninės ląstelės pasižymi transgermalnuyu plastiškumą - galimybę išsivystyti į ląstelių tipus, kurie pagal fenotipą nesusiję su originalaus ląstelių linija. Optimaliomis sąlygomis polikloninis kamieninių ląstelių linija kultūra kaulų čiulpų stromos ląstelėse prižiūrimų in vitro daugiau nei 50 padalinių, todėl galima gauti iš stromos ląstelėse milijardus iš 1 ml kaulų čiulpų aspiracija. Tačiau mezenchiminių kamieninių ląstelių būdinga heterogeniškumu populiacija, kuri pasireiškia kaip kintamumo kolonijas dydžių, skirtingais greičiais formavimo ir morfologinės įvairovės ląstelių tipų - iš fibroblastų kaip verpstės formos didelėms plokščių ląstelių. Per 3 savaites nuo kultivuoja stromos kamieninių ląstelių pastebėtus fenotipo heterogeniškumas: vienas kolonijas sudarančių mazgų kaulinio audinio, o kiti - klasteriai adipocitų, ir kiti, rečiau, formavimas salos kremzlės.

Centrinės nervų sistemos degeneracinių ligų gydymui pirmą kartą buvo panaudota embrioninio nervo audinio transplantacija. Pastaraisiais metais, vietoj vaisiaus smegenų audinių transplantacijos plieno ląstelių elementų neurospheres gautų iš neuroninių kamieninių ląstelių (.Poltavtseva, 2001). Neurofizėse yra veikiamų nervų pirmtakų ir neuroglia - tai suteikia vilties atkurti prarastą smegenų funkcijas po jų transplantacijos. Po transplantacijos ląstelių į neurospheres disperguoti žiurkės dryžuotojo kūno smegenų kūno pažymėtos jų proliferaciją ir diferenciaciją į dopaminerginių neuronų, kuri pašalina variklio asimetrijos žiurkėms su eksperimentinio gemiparkinsonizmom. Tačiau kai kuriais atvejais naviko ląstelės išsivystė iš neurofarų ląstelių, dėl kurių gyvūnai mirė (Bjorklundas, 2002).

Klinikoje atsargūs tyrimas dviejų grupių pacientams, kuriems nei pacientai, nei gydytojai nežinojo, žiūrėti juos (dvigubai aklas), kad viena grupė pacientų persodinami embriono audinių su neuronų, kurie gamina dopaminą, antra grupė pacientų padarė klaidingą žingsnį, davė netikėtų rezultatų . Pacientai, kurie buvo transplantuoti su embrioniniu nervų audiniu, jautėsi ne taip geriau, kaip kontrolinės grupės pacientai. Be to, 5 iš 33 pacientų po 2 metų po transplantacijos embriono nervinio audinio sukūrė nuolatinis diskineziją, kuri neturėjo kontrolinės grupės pacientų grupę (Kamieninės ląstelės: mokslo pažangą ir ateities mokslinių tyrimų kryptys Šalis Inst, Sveikatos JAV ...). Vienas iš neišspręstų problemų klinikinių tyrimų dalyje smegenų nervinių kamieninių ląstelių yra realiame perspektyvos ir apribojimus jų dariniai transplantacijos korekcijos CNS sutrikimų analizė. Tai yra įmanoma, kad ilgai areštas veikla sukeltas neyronogenez į hipokampo, todėl jos struktūrinių ir funkcinių pokyčių gali būti ir laipsniškam vystymuisi epilepsija veiksnys. Ši išvada yra ypač pažymėtini, nes jis atkreipia dėmesį į galimą neigiamą poveikį naujų neuronų suaugusiųjų smegenų kartos, ir neįprastos synaptic jungtys formavimas.

Mes neturėtume pamiršti, kad auginimo terpės su citokinų (mitogenus) artima kamieninių ląstelių savybes, kad vėžinių ląstelių, kaip jie atsiranda artimas pokyčius ląstelių ciklų reglamento, nustatant galimybę padalinti neribotą laiką. Neatsargiai persodinti žmogaus ankstyvojo embriono kilęs kamienines ląsteles, nes šiuo atveju piktybinių pavojus yra labai didelis. Daug saugiau naudotis savo labiau įpareigojančiais palikuonimis, ty diferencijuotų linijų progenitorių ląstelėmis. Tačiau šiuo metu dar nėra parengtas patikimas būdas gauti stabilias žmogaus ląstelių linijas, diferencijuojančias tinkama kryptimi.

Mokslinės praktikos medicinos srityje didžiulį susidomėjimą naudojasi molekulinės biologijos technologijos, skirtos paveldimų patologijų ir žmonių ligų korekcijai naudojant kamieninių ląstelių modifikacijas. Kamieninių ląstelių genomo savybės leidžia kurti unikalias transplantacijos schemas, siekiant ištaisyti genetines ligas. Tačiau šioje srityje taip pat yra keletas apribojimų, kuriuos reikia įveikti prieš prasidedant praktiniam kamieninių ląstelių genų inžinerijos taikymui. Visų pirma, būtina optimizuoti kamieninių ląstelių genomo modifikavimą ex vivo. Žinoma, kad ilgai trunkančios (3-4 savaičių) kamieninių ląstelių proliferacija sumažina jų transfekciją, todėl norint pasiekti aukštą jų genetinės modifikacijos lygį reikia kelių transfekcijos ciklų. Tačiau pagrindinė problema susijusi su terapinio geno ekspresijos trukme. Iki šiol nė viename tyrime veiksmingo išraiškos periodas po modifikuotų ląstelių transplantacijos neviršijo keturių mėnesių. 100% atvejų laikui bėgant transfekuotų genų ekspresija sumažėja dėl promotorių inaktyvacijos ir / arba ląstelių mirties modifikuotu genomu.

Svarbi problema yra korinių technologijų naudojimo medicinoje kaina. Pavyzdžiui, apskaičiuotas metinis reikalavimas finansuoti tik kaulų čiulpų transplantacijos departamento medicinines išlaidas, skirtas 50 transplantacijų per metus, yra apie 900 000 JAV dolerių.

Korinio ryšio technologijų plėtra klinikinėje medicinoje yra sudėtingas ir daugiapakopis procesas, apimantis konstruktyvų daugiadalykių mokslo ir klinikinių centrų bei tarptautinės bendruomenės bendradarbiavimą. Tuo pačiu metu ypatingas dėmesys skiriamas mokslinių tyrimų organizacijai ląstelių terapijos srityje. Svarbiausi iš jų yra klinikinių tyrimų protokolų rengimas, klinikinių duomenų teisingumo stebėjimas, nacionalinio mokslinių tyrimų registro formavimas, integracija į daugiacentrinių klinikinių tyrimų tarptautines programas ir rezultatų įvedimas į klinikinę praktiką.

Sudaryti įvadas į ląstelių transplantacijos klausimais, norėčiau išreikšti viltį, kad bendromis pastangomis pirmaujančių ekspertų Ukrainos iš įvairių mokslo sričių užtikrins didelę pažangą eksperimentinių ir klinikinių tyrimų ir leis per ateinančius metus rasti veiksmingų būdų, kaip padėti sunkiai sergantiems žmonėms, kuriems reikia organų transplantacijai audiniai ir ląstelės.

[13], [14], [15], [16], [17], [18]