13c ureazės testas: paruošimas, rezultatai, teigiamas, neigiamas

Nuo tada, kai buvo atrasta su lėtiniu gastritu bei skrandžio ir dvylikapirštės žarnos opalige susijusi Helicobacter pylori bakterija, buvo sukurti diagnostiniai metodai, įskaitant ureazės testą, leidžiantį aptikti šiuos mikroorganizmus konkrečiame paciente, patvirtinti jų dalyvavimą virškinimo trakto ligų vystymesi ir skirti veiksmingą gydymą.

Ureazės fermentas kaip Helicobacter infekcijos biožymuo

H. pylori bakterijos nuo rūgštinės skrandžio spindžio aplinkos apsisaugo dviem būdais. Pirma, pažeisdamos gleivinę savo žvyneliais, mikroorganizmai pasiekia apatinius jos sluoksnius, netgi epitelio ląsteles, kur pH yra aukštesnis (t. y. rūgštingumas mažesnis). Antra, bakterijos neutralizuoja rūgštį sintetindamos didelius kiekius kataliziškai aktyvaus didelės molekulinės masės metalofermento ureazės arba karbamido amidohidrolazės.

Ureazės naudojimas diagnozuojant Helicobacter yra įmanomas ne tik dėl šio fermento citoplazminio aktyvumo, bet ir dėl išorinės sąveikos su šeimininko ląstelėmis.

Veikiant ureazei, skrandžio šlapalas suskaidomas į vandenilio nitridą (amoniką) ir anglies dioksidą (anglies dioksidą). Jie reaguoja su skrandžio sultyse esančia druskos rūgštimi ir sukuria neutralaus rūgštingumo zoną aplink H. pylori, taip pat palaiko bakterijų ląstelių metabolizmą.

Štai kodėl ureazė yra svarbiausias H. pylori kolonizacijos veiksnys žmogaus skrandžio gleivinėje, o ureolitinio aktyvumo nustatymas laikomas šios bakterijos virulentiškumo biožymeniu, kurį gastroenterologai – atlikdami ureazės testą – naudoja Helicobacter infekcijai diagnozuoti, taip pat vaistų sukelto bakterijų sunaikinimo (išnaikinimo) rezultatams stebėti.

H. pylori diagnostika apima invazinius ir neinvazinius tyrimus – priklausomai nuo to, ar reikalingas endoskopinis skrandžio tyrimas (fibrogastroduodenoskopija), ar ne. Invazinis tyrimas yra greitasis ureazės testas arba ekspresinis ureazės testas (RUT testas), kuriam atlikti reikia paimti audinių mėginius (biopsiją). 13C karbamido kvėpavimo testas (13C-UBT) yra dažbiausiai paplitęs neinvazinis tyrimas.

Reikėtų pažymėti, kad neinvazinė H.pylori diagnostika gali būti atliekama naudojant kraujo tyrimą antikūnams (specifiškumas 75%, jautrumas - 84%), šlapimo ELISA (jautrumas 96%, specifiškumas 79%) ir koprogramą bakterijų antigenams. Daugiau informacijos - Helicobacter pylori infekcija: antikūnai prieš Helicobacter pylori kraujyje

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Procedūros nuorodos ureazės testas

H. pylori kolonizacija skrandžio gleivinėje pati savaime nėra liga, tai yra veiksnys, didinantis bakterijų kiekį organizme, kuris tam tikromis sąlygomis gali sukelti daugelio skrandžio ir viršutinės virškinamojo trakto patologijų vystymąsi.

Helicobacter infekcijos diagnostikos indikacijos, ypač ureazės testas, yra susijusios su padidėjusio rūgštingumo gastritu, antraliniu ir atrofiniu gastritu, dvylikapirštės žarnos opa, skrandžio MALT limfoma. Po endoskopinės ankstyvos stadijos skrandžio vėžio rezekcijos galima atlikti histologinį tyrimą kartu su greituoju ureazės testu – FGDS su ureazės testu.

Gastroenterologai gali paskirti ureazės testą, jei pacientai skundžiasi sunkumo ir diskomforto jausmu epigastriniame regione, dažnu rėmeniu po valgio, rūgščiu ar supuvusiu raugėjimu, kartumu burnoje, pykinimu, žarnyno sutrikimais, skausmu ar spazminiu skausmu skrandyje.

[ 8 ], [ 9 ]

Paruošimas

Pasiruošimas 13C karbamido kvėpavimo testui susideda iš šių veiksmų: pacientas turi nutraukti: antibiotikų vartojimą 4 savaites prieš testą, NVNU, protonų siurblio inhibitorių (mažinančių skrandžio rūgštingumą) ir antacidinių vaistų arba adsorbentų, vartojamų rėmeniui gydyti, vartojimą – bent dvi savaites. Bet kokių vaistų vartojimą reikia nutraukti likus penkioms–šešioms dienoms, o alkoholio vartojimą ir rūkymą – tris dienas prieš testą.

Taip pat rekomenduojama maždaug savaitę prieš tyrimą nevalgyti ankštinių daržovių, nes pupelėse, žirniuose, lęšiuose, sojos pupelėse ir pupelėse yra ureazės (kuri apsaugo augalus nuo ligų ir vabzdžių kenkėjų).

Vakare prieš tyrimą vėlyvos, sočios vakarienės valgyti draudžiama; tyrimo dieną reikia atlikti įprastą burnos higieną, o pusantros valandos prieš tyrimą negalima nieko gerti ir naudoti kramtomosios gumos.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Technika ureazės testas

Įgyvendinimo technika:

• Pirmiausia paimamas pagrindinis kvėpavimo mėginys – iškvėpimas atliekamas į minkštą plastikinį indą (ir hermetiškai uždaromas);
• skystis su pridėtu 13C-karbamidu geriamas per burną;
• Po 25–30 minučių į kitą indą paimamas antras iškvėpto oro mėginys.

Tokiu būdu gauti mėginiai analizuojami masių spektrometru, atskiriant izotopus antrame mėginyje ir nustatant jų koncentraciją. Skirtumas tarp antrojo ir pirmojo mėginio verčių išreiškiamas delta (δ), palyginti su pradiniu lygiu. Normalios vertės, t. y. neigiamos žymėto atomo 13C vertės neinfekuotiems pacientams svyruoja nuo 0,15 iki 0,46 %, o teigiamos vertės esant infekcijai yra 1,2–9,5 %, kai karbamido hidrolizės greitis yra didesnis nei 12–14 μg/min.

Paprastai tariant: 13C žymėto anglies dioksido aptikimas iškvėptame ore rodo, kad šlapalas buvo hidrolizuojamas ureazės fermento H. pylori, o tai iš tikrųjų patvirtina jo buvimą skrandyje.

H. pylori kvėpavimo testas

13C-UBT testas arba 13C karbamido kvėpavimo testas Helicobacter pylori nustatymui yra vienas svarbiausių neinvazinių šios infekcijos nustatymo metodų: esant 100 % jautrumui ir 98 % specifiškumui, klaidingai teigiamų ir klaidingai neigiamų rezultatų rizika, palyginti su histologiniais ir kraujo antikūnų tyrimais, yra 2,3 % mažesnė.

Analizė pagrįsta per burną vartojamo skysto karbamido, žymėto anglies atomu (stabilus neradioaktyvus izotopas) 13C (50–75 mg 13C-karbamido, praskiesto 100 ml skysčio), hidrolize, kurią atlieka H. pylori ureazė.

Izotopų indikatoriumi žymėtas karbamidas skrandyje hidrolizuojamas, išsiskiriant amoniakui ir anglies dioksidui, kuriuose yra žymėtųjų atomų, kurie difunduoja į kraują ir kvėpavimo metu išsiskiria iš plaučių. Žymėtas anglies dioksidas registruojamas analitiniu prietaisu – masių spektrometru, kurio veikimas pagrįstas nedispersine izotopų selektyviąja spektroskopija, arba infraraudonųjų spindulių spektroskopiniu analizatoriumi.

Greitas ureazės testas

Greitasis ureazės testas (RUT) atliekamas atliekant endoskopinį skrandžio ir dvylikapirštės žarnos tyrimą – naudojant šiuolaikinius endofibroskopus – ir vienu metu renkant biopsijos mėginius. Biomedžiaga turi būti paimta iš skrandžio antralinės dalies. Taigi fibrogastroduodenoskopija arba FGDS su ureazės testu yra invazinis diagnostinis metodas.

Gauta biopsija visiškai panardinama į paruoštą standartizuotą terpę, kurioje yra agaro gelio, karbamido, rūgščių-šarmų indikatoriaus fenolsulfoftaleino ir bakteriostatinio agento (pridedama siekiant išvengti užteršiančių mikroorganizmų augimo ir klaidingai teigiamų rezultatų).

Jei skrandžio audinio mėginyje yra H. pylori bakterijų, jų gaminama ureazė hidrolizuoja šlapalą ir padidina pH, o tai aiškiai matoma, kai indikatoriaus spalva pasikeičia iš geltonos į oranžinę (esant pH 6,8) ir violetinę (esant pH > 8). 75 % teigiamų testų spalva pasikeičia per 120–180 minučių, ir kuo greičiau keičiasi indikatoriaus spalva, tuo didesnis bakterijų skaičius. Tačiau neigiami testų rezultatai saugomi 24 valandas.

Teigiamas greitasis ureazės testas. Ką tai reiškia? Teigiamas RUT testas – indikatorius parausta – reiškia, kad biopsijos mėginyje, įdėtame į agaro terpę, yra mažiausiai 105 H. pylori bakterijų, nors jų koncentracija paprastai būna didesnė.

Įvairių bandymų modifikacijų jautrumas svyruoja nuo 90 iki 98 %, o specifiškumas – 97–99 %.

Kaip pastebėjo gastroenterologai, jei paciento išvada rodo ryškiai teigiamą ureazės testą (trys kryželiai), tai reiškia: pH > 8, o indikatoriaus spalva pasikeitė per mažiau nei 60 minučių nuo biopsijos panardinimo momento, o tai rodo didelį H.pylori kiekį ir aukštą ureazės ekspresijos lygį. Apytikslį bakterijų skaičių galima suskaičiuoti atliekant histologinį biopsijos tyrimą mikroskopu, o jei vizualizuotoje srityje jis viršija 40–50, infekcijos lygis laikomas aukštu.

13C karbamido kvėpavimo testas retai duoda klaidingai teigiamus rezultatus, o pacientams, kuriems įtariama skrandžio ar dvylikapirštės žarnos opa, vienas teigiamas testas laikomas diagnozės patvirtinimu, o neigiamas rezultatas turėtų būti patvirtintas EGD su karbamido testu.