Hepatito A virusas

Virusinis hepatitas A yra užkrečiama žmonių liga, kuriai pirmiausia būdingas kepenų pažeidimas ir kliniškai pasireiškianti intoksikacija bei gelta. Hepatito A virusą 1973 m. atrado S. Feinstone (ir kt.), naudodamas imuninės elektroninės mikroskopijos metodą ir užkrėsdamas beždžiones – šimpanzes ir marmozetes. Imuninės elektroninės mikroskopijos metodo esmė yra ta, kad į sergančio hepatitu A paciento išmatų filtratą pridedama specifinių antikūnų (pasveikusio serumo), o nuosėdos tiriamos elektronine mikroskopija. Dėl virusų sąveikos su specifiniais antikūnais jie specifiškai agreguojasi. Tokiu atveju juos lengviau aptikti, o agregacija veikiant antikūnams patvirtina patogeno specifiškumą. S. Feinstone'o atradimas buvo patvirtintas atliekant eksperimentus su savanoriais.

Hepatito A virusas yra sferinės formos, viriono skersmuo yra 27 nm. Genomą reprezentuoja viengrandė teigiama RNR, kurios MD yra 2,6 mm. Superkapsidės nėra. Simetrijos tipas yra kubinis - ikosaedras. Kapsidė turi 32 kapsomeras, ją sudaro keturi polipeptidai (VP1-VP4). Pagal savo savybes hepatito A virusas priklauso Heparnovirus genčiai, Picornaviridae šeimai. Pagal antigenus hepatito A virusas (HAV - hepatito A virusas) yra homogeniškas. HAV gerai dauginasi šimpanzių, babuinų, hamadrya babuinų ir marmozečių beždžionių organizme. Ilgą laiką viruso nebuvo galima kultivuoti. Tik devintajame dešimtmetyje pavyko gauti ląstelių kultūras, kuriose dauginasi HAV. Iš pradžių šiems tikslams buvo naudojamos ištisinės rezus makakos embriono inkstų ląstelių linijos (kultūra FRhK-4), o dabar naudojama ištisinė žaliųjų beždžionių inkstų ląstelių linija (kultūra 4647).

Remiantis PSO ekspertų rekomendacijomis, priimta tokia hepatito A viruso žymenų nomenklatūra: hepatito A virusas – HAV antikūnai prieš hepatito A virusą: anti-HAV IgM ir anti-HAV IgG.

HAV yra maža 27–30 nm skersmens dalelė, turinti ikosaedrinę simetriją ir homogeniškumą. Imuninės agregacijos metodu gauta elektronograma atskleidžia elektronų tankias daleles su paviršutiniškai simetriškai išdėstytais kapsomerais. Esant neigiamam kontrastui, preparatuose matomos ir pilnos, ir tuščios dalelės. HAV nukleokapsidė, skirtingai nei gripo viruso, neturi paviršiaus iškilimų ir membranos. Taip pat svarbu, kad HAV virionas neturi širdies formos struktūros.

Remiantis savo fizikinėmis ir cheminėmis savybėmis, hepatito A virusas priskiriamas pikornavirusų šeimai, enterovirusų genčiai, kurios serijos numeris yra 72. Tačiau ši taksonomija pasirodė esanti pernelyg neįprasta, todėl PSO manė, kad galima išlaikyti terminą „hepatito A virusas“.

Kaip ir visi Picornaviridae šeimos virusai, hepatito A virusas turi ribonukleino rūgštį. Kai kurios laboratorijos įrodė hepatito A viruso genomo klonavimo galimybę, o tai atveria galimybę gauti vakcinų.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Atsparumas hepatito A virusui

Virusas yra gana atsparus aukštai temperatūrai, rūgštims, riebalų tirpikliams (be lipidų), dezinfekavimo priemonėms ir gerai toleruoja žemą temperatūrą. Visa tai prisideda prie jo ilgalaikio išlikimo išorinėje aplinkoje. Kambario temperatūroje jis išgyvena kelias savaites, 60 °C temperatūroje iš dalies praranda užkrečiamumą po 4–12 valandų, o 85 °C temperatūroje – po kelių minučių. Jis yra labai atsparus chlorui, todėl gali prasiskverbti į vandentiekio vandenį per vandens valymo įrenginių barjerus.

Apibendrinant visus duomenis, hepatito A virusą galime apibūdinti taip:

• natūralus šeimininkas yra žmogus;
• eksperimentiniai gyvūnai – marmozetės, šimpanzės;
• infekcijos šaltinis yra išmatos;
• liga yra epideminė ir endeminė;
• perdavimo būdas: feko-oralinis;
• inkubacinis laikotarpis - 14–40 dienų;
• perėjimas prie lėtinio hepatito – nepastebėta.

HAV imunologinės savybės yra šios:

• Prototipinės padermės – Ms-1, CR-326, GВG. Visos jos yra imunologiškai panašios arba identiškos;
• Antikūnai - IgM ir IgG - susidaro reaguojant į viruso struktūrinių baltymų įvedimą ir yra apsauginiai;
• I. Apsauginis žmogaus serumo gama globulino poveikis – jei jis skiriamas prieš infekciją arba inkubaciniu laikotarpiu, jis apsaugo nuo ligos arba ją susilpnina.

NAU fizikinės ir cheminės savybės yra šios:

• Morfologija: belukštė sferinė dalelė su kubine simetrija, kapsidė sudaryta iš 32 kapsomerų;
• Skersmuo - 27-30 nm;
• Tankis CsCl (g/cm3) - 1,38–1,46 (atviros dalelės), 1,33–1,34 (subrendęs virionas), 1,29–1,31 (nesubrendę virionai, tuščios dalelės);
• Sedimentacijos koeficientas - 156–160 subrendusių virionų;
• Nukleino rūgštis yra viengrandė, linijinė RNR;
• Santykinė molekulinė masė - 2,25 × 106–2,8 × 106 KD;
• Nukleotidų skaičius yra 6 500–8 100.

HAV stabilumas veikiant fiziniams ir cheminiams veiksniams yra toks:

• Chloroformas, eteris – stabilus;
• Chloras, 0,5–1,5 mg/l, 5 °C, 15 min. – dalinė inaktyvacija;
• Chloraminas, 1 g/l, 20 °C, 15 min. – visiškas inaktyvavimas;
• Formalinas, 1:4000, 35–37 °C, 72 val. – visiškas inaktyvavimas, 1:350, 20 °C, 60 min. – dalinis inaktyvavimas.

Temperatūra:

• 20–70 °C – stabilus;
• 56 °C, 30 min. – stabilus;
• 60 °C, 12 val. – dalinė inaktyvacija;
• 85 °C, 1 min. – visiškas inaktyvavimas;
• Autoklavavimas, 120 °C. 20 min. – visiškas inaktyvavimas;
• Sausas kaitinimas, 180 °C, 1 valanda – visiškas inaktyvavimas;
• NSO, 1,1 W, 1 min. – visiškas inaktyvavimas.

Pateikti duomenys rodo, kad savo fizikinėmis ir cheminėmis savybėmis hepatito A virusas yra artimiausias enterovirusams. Kaip ir kiti enterovirusai, HAV yra atsparus daugeliui dezinfekavimo tirpalų ir visiškai inaktyvuojamas per kelias minutes 85 °C temperatūroje ir autoklave.

Įrodyta, kad hepatito A virusas gali daugintis pirminėse ir ištisinėse žmogaus ir beždžionių ląstelių kultūrų monosluoksninėse linijose. Ypač aktyvi hepatito A viruso dauginimasis in vitro kultūrose stebimas, kai kaip pradinė medžiaga naudojami sergančių beždžionių kepenų ekstraktai. Tačiau reikėtų pažymėti, kad visuose hepatito A viruso dauginimo in vitro kultūrose eksperimentuose atkreipiamas dėmesys į ilgą inkubacinį laikotarpį pirminių pasažų metu (iki 4–10 savaičių), vėliau virusinės genetinės medžiagos kaupimasis didėja, tačiau absoliučios vertės išlieka labai nereikšmingos, todėl daugelis tyrėjų kalba apie nepilną hepatito A viruso replikaciją audinių kultūrose.

Apibendrinant literatūros duomenis apie hepatito A viruso dauginimąsi ne audinių kultūrose, galima teigti, kad HAV ilgalaikio išgyvenimo in vitro faktas neabejotinas. Optimalios sąlygos stabiliam aukštam viruso replikacijos lygiui dar nėra galutinai nustatytos, ir tai trukdo tirti jo biologines savybes, gauti reagentų šaltinį diagnostikai ir vakcinų kūrimui.

Tuo pačiu metu literatūroje galima rasti ir optimistiškesnių vertinimų šia problema. Visų su hepatito A viruso kultivavimu susijusių klausimų sprendimas yra netolimos ateities reikalas. Tiriant optimalias HAV dauginimosi sąlygas rezus makakos embrioninių inkstų ląstelių kultūroje, buvo nustatytos dvi fazės: infekcinio viruso gamybos fazė (iki 6–8 dienų 5-ojo pasažo lygyje) ir intensyvaus virusinio antigeno kaupimosi fazė. Taip pat buvo parodyta, kad didžiausias virusinio antigeno kaupimasis vyksta vadinamojo ritininio kultivavimo (sukamųjų kolbų) sąlygomis. Šis metodas atveria plačias galimybes gauti kultūrinį antigeną dideliais kiekiais, todėl atsiras ir pirminė medžiaga diagnostinių sistemų paruošimui bei vakcinų gamybai.

Hepatito A epidemiologija

Hepatito A virusas yra labai patogeniškas žmonėms. Pasak PSO (1987), ligai sukelti pakanka užsikrėsti vos vienu virionu. Tačiau praktinė užkrečiamoji dozė tikriausiai yra daug didesnė. Vienintelis infekcijos šaltinis yra užsikrėtęs asmuo. Virusas dideliais kiekiais išsiskiria su išmatomis 12–14 dienų iki geltos pradžios ir per 3 ikterinio periodo savaites. Reikšmingų patogeno išsiskyrimo skirtumų tarp pacientų, sergančių ikterine, anikterine ir besimptome hepatito A forma, nenustatyta. Infekcijos kelias yra fekalinis-oralinis, daugiausia per vandenį, taip pat per buitį ir maistą. Infekcijos kelias yra fekalinis-oralinis, daugiausia per vandenį, taip pat per buitį ir maistą. Pagrindinis (pirminis) viruso perdavimo būdas yra per vandenį. Taip pat galima užsikrėsti oro lašeliniu būdu. Populiacijos jautrumas yra universalus. Dažniausiai serga vaikai iki 14 metų. Liga pasižymi ryškiu rudens-žiemos sezoniškumu.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

Hepatito A simptomai

Inkubacinis periodas svyruoja nuo 15 iki 50 dienų, priklausomai nuo infekcinės viruso dozės, tačiau vidutiniškai yra 28–30 dienų. Patekęs į organizmą, hepatito A virusas dauginasi regioniniuose limfmazgiuose, prasiskverbia į kraują, o po to į kepenų ląsteles ir sukelia ūminį difuzinį hepatitą, kurį lydi hepatocitų ir kepenų retikuloendotelinių elementų pažeidimas bei jų detoksikacijos ir barjerinių funkcijų sumažėjimas. Hepatocitų pažeidimas atsiranda ne dėl tiesioginio viruso poveikio, o dėl imunopatologinių mechanizmų. Būdingiausias hepatito A vaizdas yra ūminė ikterinė ciklinė forma: inkubacinis periodas, prodrominis (priešikterinis), ikterinis periodas ir sveikimas. Tačiau infekcijos židiniuose aptinkama daug pacientų, sergančių anikterinėmis ir besimptomėmis infekcijos formomis, kurių skaičius gerokai viršija ikterines („ledkalnio fenomenas“).

Po infekcijos susidarantis imunitetas yra stiprus ir ilgalaikis, jį sukelia virusą neutralizuojantys antikūnai ir imuninės atminties ląstelės.

Hepatito A mikrobiologinė diagnostika

Hepatito A diagnostika (išskyrus gyvūnų – šimpanzių, marmozečių, babuinų – užkrėtimą, kurios mes neturime) grindžiama įvairiais imunologiniais metodais: RSC, imunofluorescencijos metodu, imuninės adhezijos hemagliutinacija (viruso antigeno + antikūno kompleksas, esant komplementui, adsorbuojamas ant eritrocitų ir sukelia jų suklijavimą). Tačiau šių metodų taikymo galimybės yra ribotos dėl specifinių virusinių antigenų trūkumo, o imunofluorescencinei reakcijai reikalinga kepenų biopsija, kuri yra nepageidautina. Imuninės elektroninės mikroskopijos metodas yra patikimas ir specifinis, tačiau labai daug darbo reikalaujantis. Todėl iki šiol vienintelė priimtina imunologinė reakcija yra kietosios fazės imunosorbentinės analizės metodas IFM arba RIM pavidalu, ypač modifikuojant M klasės imunoglobulinų „pagavimą“. Mūsų šalyje šiam tikslui buvo pasiūlyta tyrimų sistema – „DIAGN-A-HEP“. Šios tyrimų sistemos veikimo principas yra toks. Pirmiausia ant polistireno šulinių sienelių sorbuojami antikūnai prieš M klasės imunoglobulinus (antiimunoglobulinai M), tada pridedamas tiriamojo paciento serumas. Jei jame yra IgM antikūnų, jie jungiasi prie M klasės antikūnų, tada pridedamas specifinis virusinis antigenas (hepatito A virusas), kuris gaunamas auginant ląstelių kultūroje. Sistema plaunama ir prie jos pridedami krienų peroksidaze žymėti antivirusiniai antikūnai. Jei sąveikauja visi keturi sistemos komponentai, susidaro keturių sluoksnių „sumuštinis“:

• antiimunoglobulinai M,
• imunoglobulinai M (prieš hepatito A virusą - tiriamojo paciento serume),
• virusinis antigenas,
• fermentais žymėti antivirusiniai antikūnai.

Norint aptikti šį kompleksą, į šulinėlius įpilamas fermento substratas. Veikiant fermentui, jis sunaikinamas ir susidaro spalvotas produktas. Spalvos intensyvumą galima kiekybiškai išmatuoti naudojant spektrofotometrą arba fotokolorimetrą.

IgM „gaudymo“ metodo privalumas yra tas, kad šios imunoglobulinų klasės antikūnai atsiranda pirminio imuninio atsako metu ir rodo aktyvią infekcijos stadiją, o po ligos jie išnyksta. Priešingai, IgG klasės antivirusiniai antikūnai išlieka ilgą laiką po ligos, suteikdami įgytą imunitetą. Hepatito A virusui aptikti pasiūlytas DNR zondo metodas: kaip zondas naudojama komplementinė vRNR DNR.

Hepatito A gydymas

Kadangi virusinio hepatito atveju sutrinka interferono gamyba, hepatito A gydymas pagrįstas interferono ir jo endogeninės sintezės induktoriaus amiksino vartojimu.

Specifinė hepatito A prevencija

Anksčiau plačiai taikyta hepatito A serologinė profilaktika gama globulinu nepasiteisino, todėl pagrindinis dėmesys buvo skiriamas vakcinacijos profilaktikai, atliekama vakcinacija nuo hepatito A. Šiuo tikslu kuriamos ir jau naudojamos įvairios vakcinos. Rusijoje veiksminga vakcina nuo hepatito A buvo gauta dar 1995 m., ir dabar ji sėkmingai naudojama.