Imunologiniai urologijos tyrimai

Imunogramos priskyrimas urologiniam pacientui reiškia, kad gydantis gydytojas priima imuninės sistemos sutrikimų buvimą. Pasikartojančius bakterines, virusines, grybelinių infekcijų, alerginės reakcijos, sisteminės ligos gali būti simptomai šių sutrikimų, kurie yra pasižyminčių sindromų (infekcijos, vėžio, alergija, autoimuninių, limfinio audinio) skaičius. Vienas pacientas gali turėti keletą sindromų. Pavyzdžiui, lėtinės infekcinės ligos (infekcinės sindromas) gali sukelti imuninį trūkumą ir imunodeficito gali pasireikšti polinkį infekcinių ligų ir vėžio (vėžio sindromas). Infekcijos gali pasireikšti antrinio imunodeficito fone, kuri atsirado dėl limfoproliferacinės ligos, pavyzdžiui, leukemijos. Yra trys pagrindinės imuninės sistemos patologinių pokyčių grupės:

• kiekybinis ar funkcinis nepakankamumas vienoje ar kitoje imuniteto jungtyje, dėl kurio atsiranda imunodeficito būklė;
• imuninės sistemos antigeno atpažinimo pažeidimas, dėl kurio atsiranda autoimuninių procesų raida;
• padidėjęs ar "iškraipytas" imuninis atsakas, pasireiškiantis alerginių ligų atsiradimu.

Yra atranka (1 lygio bandymai) ir imunologinės diagnostikos metodai (2 lygių tyrimai). Pirmasis egzistuoja nustatyti pažeidimus imuninei sistemai, o pastarosios - nustatyti mechanizmus, susijusius su jų įgyvendinimu, siekiant tolesnio imuninės korekcijos.

B-ląstelinis imuniteto ryšys

Atrankos metodai

• Nustatymas santykinę ir absoliučią skaičiaus B-limfocitų per imr.rnofluorescencija arba tėkmės citometrijos naudojant monokloninius antikūnus B-ląstelių antigenų (CD19, CD20, kur kompaktinio - klasterio diferenciacijos). Suaugusiųjų B-limfocitų kiekis yra normalus: 8-19% viso leukocitų ar 190-380 ląstelių / μl. Padidinus B limfocitų kiekį atsiranda ūminio ir lėtinio bakterinių ir grybelinių infekcijų, lėtine kepenų liga, sisteminė jungiamojo audinio ligomis, lėtiniu limfoleukemijos, daugine mieloma.
• Nustatymas imunoglobulinų nespespetsificheskih (F, M, G, E) koncentracijos nustatytas radialinės imunodifuzijos, arba turbometrii nephelometry, radioimuninei arba imunofermentinį (PAV). Normos suaugusiems: imunoglobulinas (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Imunoglobulinų koncentracija padidėja tais pačiais patologinėmis sąlygomis, kai pasireiškia B limfocitų kiekio padidėjimas. Imunoglobulinų koncentracijos sumažinti yra įgimta hipogamaglobulinemiją, navikai imuninės sistemos, pašalinimas blužnies, baltymų nuostoliai, ligų, inkstų ar žarnyne, gydymo citostatikais immunodepreesantami.

Nurodykite metodus

• Cirkuliuojančių imuninių kompleksų nustatymas kraujyje selektyviu nusėdimu polisilenglikolyje, po to spektrofotometrinio tankio tyrimas (normalus 80-20 UE). Cirkuliuojančių imuninių kompleksų padidėjimas būdingas ūminėms bakterinėms, grybelinėms, virusinėms infekcijoms, autoimuninėms, imuninės kompleksinėms ligoms, serumo ligoms, 3 tipo alerginėms reakcijoms;
• Savitojo imunoglobulinų kraujo, susijusių su bakterinės ir virusinės antigenų, Deoksiribonukleorūgštis (DNR) į autoimuninių ligų, spermos (autoimuninė nevaisingumo) ir protivopochechnyh antikūnų (pielonefrito ir glomerulonefritas) identifikavimo radialinės imunodifuzijos arba ELISA.
• Antispermatozoidų antikūnų nustatymas sperma [MAR testas (mišrus antiglobulino reakcija)] norma yra neigiama.
• Imunoglobulinų koncentracijos nustatymas šlapime diferencialinės diagnozės nustatymui tarp pyelonefrito ir glomerulonefrito (proteinurijos selektyvumas).
• IgE nustatymas prostatos sultyse alerginio prostatito diagnozei radialios imunodifuzijos ar ELISA metodu. 
• Tyrimai reagavimo blasttransformation reakcijos limfocitų B ant B-ląstelių mitogeno (Alkiermes mitogeno stimuliavimo blasttransformation reakcijos B-limfocitų į T-limfocitų buvimas), kuriame standartinis vertė 95-100%.

Imuniteto T-ląstelių ryšys

Atrankos metodai

• Nustatymas santykinę ir absoliučią skaičiaus subrendęs CD3 T limfocitų reakcija imunofluorescencijos arba srauto cytofluorometry naudojant anti-SDZ monokloninius antikūnus. Suaugusiųjų norma yra 58-76% arba 1100-1700 ląstelių / μl. Sumažinti, T-limfocitų nepakankamumas rodiklis ląstelinių imuniteto skaičių. Tai yra būdinga kelių antrinių ir pirminių imunodeficitu (lėtinio bakterinės ir virusinės infekcijos: tuberkuliozės, įgytą imunodeficito sindromą, vėžį, lėtinio inkstų funkcijos nepakankamumo, traumą, stresą, senėjimo, mitybos, gydymo citotoksiniais vaistais, jonizuojančios spinduliuotės). Padidinti T-limfocitų skaičius yra prieš imuninės hiperaktyvumo arba limfinio ligų fone. Kai uždegimas T-limfocitų kiekio padidėja pirmiausia ir tada nuleistas. T-limfocitų sumažėjimo nebuvimas rodo uždegiminio proceso lėtinimą.
• Limfocitų subpopuliacijų vertinimas.
  • T-pagalbininkų skaičiaus nustatymas (anti-CD4 antikūnas). Paprastai 36-55% arba 400-1100 ląstelių / μl. Padidinus šių ląstelių skaičių pasitaiko autoimuninės ligos, Valdenstrom'o liga, imuninė aktyvacijos antitransplantatsionnogo; sumažinimas atitinkamus T helperių ląstelių skaičiaus įvyksta lėtinių bakterines, virusines, pirmuonių infekcijos, tuberkuliozės, įgyto imunodeficito sindromo, piktybinių navikų, nudegimų, traumų, mitybos, senėjimo, citostatikų, jonizuojančia spinduliuote.
  • T-slopiklių (anti-CD4 antikūnų) skaičiaus nustatymas. Paprastai 17-37% arba 300-700 ląstelių / μl. T-slopintuvų skaičiaus padidėjimas atsiranda tais pačiais sąlygomis, kai T-padėjėjų skaičius mažėja, o jų sumažėjimas tokiomis pačiomis sąlygomis, kai padidėja T-pagalbininkų turinys.
  • Imunoreguliacinis indeksas CD4 / CD8, norma 1,5-2,5. Hiperaktyvumas esant normoms daugiau nei 2,5 (alerginės ir autoimuninės ligos); hipoaktyvumas - mažiau nei 1,0 (polinkis į lėtines infekcijas). Pasibaigus uždegiminiam procesui, imunoreguliacinis indeksas pakyla, o kai jis sumažėja, jis normalizuojasi.

Nurodykite metodus

• Natūralių žudikių (NK ląstelių) nustatymas - anti-CD16 ir anti-CD56 antikūnai. CD 16 limfocitų norma yra 6-26%, CD56 - 9-19%. Didinant NK-ląstelių skaičių įvyksta transplantato atmetimą, mažėjimą - virusinių infekcijų, vėžio, pirminių ir antrinių imunodeficitu, nudegimų, traumų ir streso, gydymo kartu su citostatikais, ir jonizuojančia spinduliuote. 
• T-limfocitų skaičiaus nustatymas su interleukino-2 receptoriumi (aktyvavimo žymuo) - anti-CD25 antikūnai. Ši norma yra 10-15%. In jų skaičius padidėjimas buvo pastebėtas alerginių ligų, transplanto atmetimo, ūmaus pirminės infekcijos, sumažinimas metu reaguojant į Užkrūčio liauka-priklauso nuo antigenų - tomis pačiomis ligų, kurie yra susiję su sumažinti NK-ląstelių skaičių.
• Aktyvacijos žymeklio ekspozicija - II klasės HLA-DR histocompatibumo molekulė. Padidėja ekspresija pasireiškiant uždegiminiais procesais, sergantiems hepatitu C, celiakija, sifiliu, ūminėmis kvėpavimo takų infekcijomis.
• Limfocitų apoptozės įvertinimas. Kad, limfocitų apoptozės parengties nuoroda gali būti identifikuojamos pagal jų išraiška paviršiaus Fas-receptorių (CD95) Mitochondrija ir BD-2 protoonkogeno. Apoptozę buvo įvertintas limfocitų perdirbimo du fluorescencinės dažikliai: propidiumo jodido, kuris rišasi su DNR fragmentų ir aneksino Y, surišta fosfatidilserino prie ląstelės membranos, įtrauktos pradžioje apoptozės. Rezultatų įvertinimas atliekamas srauto citofluorimetru. Rezultatų apskaičiavimas remiasi ląstelių, dažytų įvairiais dažikliais, santykiu. Grynas ląstelės gyvybingos ląstelės, susijusios tik su aneksino Y, - ankstyvieji požymiai apoptozės, su propidiumo jodido ir aneksino Aš - Vėlyvas apraiškos apoptozės, dėmių tik propidiumo jodido rodo nekrozė.
• T-limfocitų proliferacijos in vitro įvertinimas.
  • Ląstelių blastogeniškumo pasikeitimas yra reakcija iš limfocitų transformacijos. Leukocitai inkubuojami su bet kokia augalinės kilmės mitogeno (lektinais). 72 valandas dažniausiai naudojamas fitohemagliutininas, tada tepkite, dulkite ir skaičiuokite blastus! Stimuliacija indeksas - procentinės dalies transformuotų ląstelių eksperimente (kultūros su PHA) į transformuotų ląstelių procentą kontrolės santykis (kultūros be PHA). Limfocitų plokštelinės transformacijos reakcija gali būti įvertinta įtraukiant radioaktyvią etiketę (ZN-timdinas) į kultivuotas ląsteles, kai dalijant ląsteles padidėja DNR sintezė. Sutrikimai proliferacinio atsako kyla tiek pirminės ir antrinės imunodeficitu, susijusių su infekcijų, vėžio, inkstų nepakankamumu, chirurginių intervencijų.
  • Vertinimo iš šių tyrimų, suaktyvinimo žymenimis (CD25, transferino receptorių - CD71) išraiška molekulių ir MHC II klasės HLA-DR, kurie iš esmės yra nėra dėl poilsio T-limfocitų. T limfocitai stimuliuojamos fitohemaglutinino po 3 dienų ekspresijos aktyvinimo žymekliai buvo analizuojami tiesiogiai ar netiesiogiai imr.rnofluorescencija, tėkmės citometrijos naudojant monokloninius antikūnus išskirtus receptoriai.
  • Matavimo ir mediatorių sumą sintetinamas aktyvuotų T limfocitų [interleukino (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gama-interferono ir kt], radioimunoanalizės arba ELISA. Ypač svarbu yra tokia koncentracija, įvertis Y-interferonas ir IL-4 abu žymekliai Th2 ir kultūrų supernatanto ir aktyvuota ląstelės viduje. Jei įmanoma, ji yra naudinga nustatyti geno ekspresiją už atitinkamą citokino kurį žinianešio ribonukleininės rūgšties kiekis treoninas gamybos ląstelių ir receptorių ekspresijos intensyvumo atitinkamų citokinų.
    
• Limfocitų migracijos slopinimo reakcija. Jautrinantys T limfocitai reaguodami su antigeno išskiriamais limfokinais, įskaitant faktorius. Slopina limfocitų migraciją. Slopinimo reiškinys stebimas, kai mitogenai patenka į ląstelių kultūrą. Slopinimo laipsnio įvertinimas leidžia spręsti apie limfocitų gebėjimą išlaisvinti citokinus. Paprastai migracijos dažnis, priklausomai nuo konkretaus mitogeno, yra 20-80%.
• NK ląstelių citotoksiškumo įvertinimas. Nustatykite natūralių žudikių ląstelių gebėjimą nužudyti nukreiptas eritromeliozės linijos K-562 ląsteles. Jei vertinamas nuo antikūnų priklausomas citotoksiškumas, naudojamos ląstelės, kurios yra padengtos IgG antikūnais. Tikslinės ląstelės yra paženklintos 3H-uridine ir inkubuojamos su efektorinėmis ląstelėmis. Paskirties ląstelių mirtis apskaičiuojama nuo radioaktyviosios etiketės išleidimo į tirpalą. Citotoksiškumo sumažėjimas atsiranda su piktybiniais navikais. Kai kuriais atvejais, kai reikia numatyti interleukinų gydymo veiksmingumo prognozę, inkubuojant tam tikras citokinas, NK ląstelių citotoksiškumas vertinamas.

Fagocitų funkcijos tyrimas

Atrankos metodai

Absorbcijos intensyvumas phagocytes Tyrimas Mikrobinių ląstelių (fagocitozei latekso dalelių, bandymo kultūros aureus, Escherichia coli, arba mikroorganizmų, išskirtame iš paciento). Centrifuguojant heparinizuotą kraują, išskiriamas leukocitų suspensija, o opozicijai pridedama IV kraujo grupė serume (oponinai yra baltymai, kurie stiprina fagocitozę). Mikrobinė suspensija praskiedžiama, sumaišoma su leukocitais ir inkubuojama 120 min., Mėginių ėmimas analizei praėjus 30,90,120 min. Po inkubacijos pradžios. Iš pasirinktų leukocitų suspensijų tepuoja. Nustatykite šiuos fagocitozės rodiklius:

• fagocitinis indeksas - ląstelių, patenkančių į fagocitozę per 30 min ir 120 min inkubacijos, procentinė dalis; fagocitinio indekso norma (30) 94% fagocitinio indekso (120) - 92%;
• fagocitinis skaičius - vidutinis bakterijų, kurios yra ląstelės, skaičius; fagocitinio skaičiaus norma (30) 11%, fagocitinis skaičius (120) - 9,8%;  
• fagocitinio skaičiaus koeficientas - fagocitinio skaičiaus (30) ir fagocitinio skaičiaus santykis (120); normalus 1.16;
• neutrofilų baktericidinis indeksas yra fagocituose užmuštų mikrobų skaičiaus santykis su bendru mikrobų skaičiumi; 66% norma.

Nurodykite metodus

• Fagocitų baktericidinio aktyvumo tyrimas nitrozino tetrazoliu (NST) tyrimu yra NST testas. Leukocitams pridedamas azoto tetrazolio geltono spalvos. Kai dažiklis absorbuojamas neutrofiliu, sumažinimo procesas vyksta veikiant deguonies laisvųjų radikalų, dėl to susidaro mėlynas dažymas. Reakcija atliekama 96 šulinėlių plokščiadugnėje plokštelėje. Pirmuose trijuose šuliniuose, kuriuose yra HCT ir leukocitų mišinys, yra pridėtas Hanko tirpalas (spontaniškas HCT), pastarosiose - latekso dalelės; inkubuojama 25 ° C temperatūroje 37 ° C temperatūroje. Rezultatai skaitomi 540 nm skaitytojui ir išreiškiami įprastiniais vienetais. Apskaičiuokite stimuliavimo faktorių (K _st ), lygų optinio tankio santykiui stimuliuotuose šuliniuose ir vidutinį optinį tankį šuliniuose be stimuliacijos. Sveikiems žmonėms _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Sukibimo molekulių tyrimas. Su srauto citofluorimetrijos pagalba nustatomas CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 paviršiaus antigenų ekspresija. Imunodeficidai su sukibimo pažeidimu pasireiškia atsinaujinančia infekcija, lėta žaizdų gijimas ir infekcijos židinių nebuvimas.

Komplekso sistemos tyrimas

Atrankos metodai

Komplemento hemolizinio aktyvumo nustatymas - komplemento aktyvavimo klasikinio kelio tyrimas. Skirtingi paciento ir sveiko žmogaus serumo tirpalai pridedami prie antikūnų dengto avino eritrocitų. Hemolizinio aktyvumo vienetas imamas kaip atvirkštinis serumo skiedimas, kuriame sunaikinama 50% eritrocitų. Hemolizės laipsnis fotometriškai nustatomas pagal hemoglobino kiekį tirpale. Komplekso hemolizinio aktyvumo sumažėjimas pastebėtas sisteminės raudonosios vilkligės, kai inkstų pažeidimas, ūmus glomerulonefritas. Kombinuoti imunodeficito, myasthenia gravis, virusinis hepatitas, limfomos, padidėjusi obstrukcinė gelta, tiroiditas Hashimoto. Reumatas, reumatoidinis artritas, tarpinisis periarteritas. Dermatomiozitas, miokardo infarktas, opinis kolitas, Reiterio sindromas, podagra.

Nurodykite metodus

• Komponentų komponentų nustatymas. Kiekybinis nustatymas atliekamas radialinio imunodifuzijos ir nephelometrijos metodu.
  Tyrimas nėra informatyvus, nebent komplemento komponentų antigeninės savybės yra pakeistos.
• Buvo nustatyta, kad komplemento Clq komponentas sustiprina fagocitozę ir tarpininkauja ląstelių citotoksiškumui. Jo sumažėjimas pasireiškia imuninių kompleksų ligomis, sistemine raudonąja vilklige, gleivinėmis infekcijomis ir navikais.
• C3 komponentas dalyvauja aktyvinant klasikinį ir alternatyvų komplemento kelią. Jo koncentracijos sumažėjimas yra susijęs su lėtinėmis bakterinėmis ir grybelinėmis infekcijomis, cirkuliuojančių ar audinių imuninių kompleksų buvimu.
• C4 komponentas dalyvauja aktyvinant klasikinį kelią. Jo koncentracijos sumažėjimas yra susijęs su ilgesniu komplemento su imuniniais kompleksais aktyvavimu ir C1 inhibitoriaus, kuris kontroliuoja klasikinio komplemento kelio aktyvavimą, koncentracijos sumažėjimą. C4 trūkumas yra sisteminė raudonoji vilkligė, C4-padidinimas įvyksta su inkstų liga, transplantato atmetimą, ūminio uždegimo, ligų, skrandžio ir žarnyno trakto.
• C5a yra nedidelis C5 molekulės fragmentas, išsiskiriantis iš jo dėl komplemento sistemos aktyvavimo. Jo koncentracija padidėja dėl uždegimo, sepsio, atopinių ir alerginių ligų.
• Cl inhibitorius yra daugiafunkcinis veiksnys. Jis kontroliuoja komplemento C1 komponento aktyvavimą, slopina kallikreino, plazmino ir aktyvinto faktoriaus Hageman aktyvumą, proteazių Cls ir Or. C1 inhibitoriaus trūkumas sukelia angioedemą.
• papildomi tyrimai. Į standartinį serumą, kuriame nėra komplemento komponento, pridedamas tiriamasis serumas ir nustatomas komplemento hemolizinis aktyvumas. Jei hemolizinis aktyvumas nėra normalus, manoma, kad šio komplemento komponento aktyvumas tyrimo serume sumažėja.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]