Bence-Jones baltymas

Sveiko žmogaus šlapime nėra Bence-Jones baltymo, kurį reprezentuoja lengvosios imunoglobulinų grandinės, kurios aptinkamos dėl piktybinių navikų procesų susidarymo.

Laboratoriniai tyrimai, skirti nustatyti specifinius mažos molekulinės masės baltymus, yra būtini diagnozuojant daugybę patologinių būklių (dažniausiai β-imuninės sistemos problemų), taip pat nustatant taikomo gydymo veiksmingumą.

Per didelis Bence-Jones baltymo kiekis susidaro plazminėse ląstelėse, juda su krauju ir išsiskiria su šlapimu. Būtent pastaroji baltymų kūnelių savybė leidžia įtarti šias ligas tiriant šlapimą:

• mieloma;
• osteosarkoma;
• plazmacitoma;
• lėtinė limfocitinė leukemija;
• limfogranulomatozė;
• pirminė amiloidozė;
• makroglobulinemija;
• idiaptinė monokloninė gamaopatija.

Kliniškai patvirtintas ryšys tarp specifinio baltymo išsiskyrimo ir vėlesnio inkstų funkcijos sutrikimo, kurį sukelia toksinis baltymų kūnelių poveikis inkstų kanalėlių epitelio struktūroms, o tai savo ruožtu sukelia distrofijos, Fanconi sindromo ir inkstų amiloidozės reiškinį.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Bence'o Joneso baltymas šlapime

Baltymų buvimas šlapime vadinamas proteinurija. Prerenalinė proteinurija suprantama kaip didelis mažos molekulinės masės baltymų kiekis šlapime. Šiuo atveju inkstų filtras ir kanalėliai nepažeidžiami, o normali inkstų funkcija negali užtikrinti baltymų kūnelių reabsorbcijos. Ekstrarenalinė (klaidinga) proteinurija, t. y. atsirandanti nepažeidus inkstų funkcijos, rodo infekcinio ar piktybinio proceso buvimą organizme. Proteinurija stebima 60–90 % mieloma sergančių pacientų. Apie 20 % patologinių būklių yra Bence-Jones mieloma.

Bence-Jones baltymas šlapime diferencijuojasi dėl humoralinių β-imuninės sistemos pokyčių. Baltymų kūnelių atsiradimas siejamas su mielomos patologija, paraproteinemine hemoblastoze, endoteliozė, Valdenstromo makroglobulinemija, limfine leukemija, osteosarkomomis. Bence-Jones baltymo nustatymas šlapime yra svarbus diagnostinis ir prognostinis žingsnis. Dėl mažos molekulinės masės Bence-Jones baltymas išsiskiria su šlapimu, pažeisdamas inkstų kanalėlių epitelį, dėl ko kyla inkstų nepakankamumo, kuris gali sukelti mirtį, išsivystymo rizika. Taip pat svarbu laiku klasifikuoti baltymą pagal tipą: λ-baltymas turi didesnį nefrotoksinį poveikį nei κ.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Bence'o Joneso baltymų tyrimas

Šlapime esantys baltyminiai kūneliai, išskyrus serumą, rodo limfinę leukemiją, osteosarkomą arba mielomą (kaulų čiulpų navikinius procesus). Kai šlapimo filtratas kaitinamas iki 45–60 °C, Bence-Jones baltymas nusėda drumstų nuosėdų pavidalu ant mėgintuvėlio sienelių. Toliau didinant temperatūrą iki virimo temperatūros, išsiskyrusios drumstys ištirpsta.

Bence-Jones baltymo kiekybinis tyrimas atliekamas taip:

• naudojant dalį vandens ir dalį azoto rūgšties kaip reagentą;
• į mėgintuvėlį įpilant azoto rūgšties (0,5–1 ml), sluoksniuojant tokį patį tiriamojo šlapimo lygį;
• rezultato įvertinimas po 2 minučių (plono žiedo atsiradimas skystos terpės riboje rodo 0,033 % baltymų kūnų buvimą).

Stebint siūlinį žiedą, šlapimą reikia skiesti vandeniu santykiu 1:1, storo žiedo atsiradimas rodo, kad reikia sumaišyti dalį šlapimo su trimis dalimis vandens, o kompaktiško žiedo atveju dalis šlapimo skiedžiama septyniomis vandens dalimis. Be to, skiedimas tęsiamas tol, kol per 2–3 bandymo minutę atsiranda būdingos nuosėdos.

Baltymų kiekis apskaičiuojamas 0,033 % padauginus iš praskiedimo vertės. Pavyzdžiui, šlapimas buvo praskiestas 10 kartų, baltymų kūnelių žiedas pasirodė po 3 tyrimo minutės, tada baltymų įterpimo procentas apskaičiuojamas taip: 0,033 x 10 = 0,33.

Jei nuosėdų nėra, įvertinamas drumstumo laipsnis – ryškūs, silpni arba vos pastebimi drumstumo pėdsakai.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ]

Bence'o Joneso baltymų sekrecija

Priklausomai nuo išskiriamo imunoglobulino tipo, išskiriami šie imunoglobulino tipai:

• lengvosios grandinės patologijos (Bence'o Joneso baltymo sekrecija);
• glomerulopatija (kitų imunoglobulinų sekrecija).

Taip pat galimi įvairūs inkstų pažeidimo deriniai. Kaip rodo praktika, nefropatija yra limfoproliferacinės patologijos (daugybinės mielomos, lėtinės limfocitinės leukemijos, Valdenstromo ligos ir kt.) pasekmė.

Patekusios į kraują, kaip ir visi baltymai, kurių molekulinė masė yra iki 40 kDa, lengvosios grandinės apeina inkstų filtrą, o per lizosomas suskyla į oligopeptidus ir aminorūgštis. Lengvųjų grandinių perteklius sukelia katabolizmo reakcijos sutrikimą ir galimą lizosominių fermentų išsiskyrimą, dėl kurio atsiranda kanalėlių audinio nekrozė. Baltymų kūneliai nesugeba reabsorbuotis, o kai monokloninės lengvosios grandinės jungiasi su Tamm-Horsfall baltymu, distaliniuose kanalėliuose susidaro baltymų cilindrai.

Bence'o Joneso baltymas mielomos ligoje

Daugybinė mieloma yra patologinė būklė, kai organizmas gamina lengvąsias imunoglobulinų grandines vietoj pilnaverčių. Ligos diagnozė ir būklės stebėjimas atliekami laboratoriniais šlapimo tyrimais, kurie rodo kiekybinį baltymų kūnelių kiekį. Mielomos potipio specifikacija pagrįsta kraujo serumo analize. Klinikiniai ligos požymiai: kaulų skausmo sindromas, šlapinimosi sutrikimai, nežinomos kilmės hematomos, skysčių susilaikymas organizme.

Mielomos atveju Bence-Jones baltymas nustatomas remiantis standartiniais tyrimais, kurie rodo kiekybinį baltymų kūnelių kiekį ir įvertina inkstų pažeidimo laipsnį. Baltymo nustatymas šlapime paaiškina epitelio pažeidimą su inkstų stromos skleroze, kuri laikui bėgant suformuoja inkstų nepakankamumą – dažną mirties priežastį dėl mielomos pažeidimo (Bence-Jones baltymas visiškai užkemša kanalėlius, neleisdamas šlapintis).

Statistiniai duomenys rodo, kad mieloma diferencijuojasi vyresniems nei 60 metų vyrams, turintiems genetinį polinkį, kenčiantiems nuo nutukimo ir imunosupresijos, taip pat patyrusiems sąlytį su toksinėmis ir radioaktyviomis medžiagomis.

[ 20 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Bence-Jones baltymo nustatymas

Norint atskirti konkretų baltymą, atliekamas laboratorinis vidutinės rytinio šlapimo dalies tyrimas (reikalingas ne mažesnis kaip 50 ml tūris). Bence-Jones baltymo buvimas nustatant kiekybinį komponentą gali būti nustatytas imunofiksacijos metodu. Baltymai atskiriami elektroforezės būdu, po kurios atliekama imunofiksacija naudojant specialius serumus. Kai baltymas jungiasi su imunoglobulinų lengvųjų ir sunkiųjų grandinių antikūnais, susidaro imuniniai kompleksai, kurie įvertinami dažymu.

Reikėtų pažymėti, kad net ir minimali baltymų koncentracija nustatoma dėl nusodinimo reakcijos į sulfosalicilo rūgštį. Bence-Jones baltymas nustatomas sumaišius filtruotą šlapimą (4 ml) su acetato buferiu (1 ml). Vėlesnis kaitinimas iki 60 °C vandens vonelėje ir palaikymas 15 minučių su teigiamu mėginiu sukuria būdingas nuosėdas. Šis metodas laikomas patikimiausiu. Pernelyg rūgštinė arba šarminė aplinka ir mažas santykinis šlapimo tankis gali neigiamai paveikti analizės rezultatus.

Tyrimo metodai, kuriuose Bence-Jones baltymas ištirpinamas kaitinant iki 100 °C arba vėl nusodinamas atvėsus, yra nepatikimi, nes ne visi baltymo elementai turi atitinkamas savybes. Tačiau indikatorinio popieriaus naudojimas visiškai netinka Bence-Jones baltymui aptikti.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ]