Konfokalinė ragenos gyvavimo trukmės mikroskopija

Konfokalinė ragenos mikroskopija yra vienas iš šiuolaikinių tyrimo metodų, leidžiančių stebėti ragenos būklę intravitaliniu būdu, vizualizuojant audinius ląstelių ir mikrostruktūros lygmenyje.

Šis metodas, dėl originalios mikroskopo konstrukcijos ir didelės skiriamosios gebos, leidžia vizualizuoti gyvą ragenos audinį, išmatuoti kiekvieno jo sluoksnio storį ir įvertinti morfologinių sutrikimų laipsnį.

Ragenos konfokalinės mikroskopijos tikslas

Apibūdinti ragenos morfologinius pokyčius, atsirandančius sergant įvairiomis uždegiminėmis ir distrofinėmis ligomis, taip pat dėl chirurginių intervencijų ir CL poveikio.

Morfologinio tyrimo duomenys yra būtini norint įvertinti patologinio proceso sunkumą, gydymo veiksmingumą ir nustatyti paciento valdymo taktiką.

Procedūros nuorodos

• Uždegiminės ragenos ligos ( keratitas ).
• Ragenos distrofinės ligos ( keratokonusas, Fukso distrofija ir kt.).
• Sausų akių sindromas.
• Būklės po chirurginių intervencijų ragenoje (praduriamoji ragenos transplantacija, keratorefrakcinės operacijos).
• Su kontaktinių lęšių nešiojimu susijusios būklės.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Paruošimas

Šį tyrimą galima atlikti nenaudojant anestetikų. Ant konfokalinio mikroskopo objektyvo užlašinamas lašas panardinimo skysčio. Tai pašalina tiesioginį lęšio sąlytį su ragena ir sumažina epitelio pažeidimo riziką.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Technika ragenos konfokalinė mikroskopija

Tyrimas atliekamas naudojant „ConfoScan 4“ („Nider“) konfokalinį mikroskopą, kurio didinimas yra 500 kartų. Prietaisas leidžia apžiūrėti rageną per visą jos storį.

Tiriamo ploto dydis yra 440 × 330 μm, skenuojančio sluoksnio storis – 5 μm. Lęšiukas su gelio lašeliu priglaudžiamas prie ragenos, kol paliečia, ir įstatomas taip, kad panardinimo skysčio sluoksnio storis būtų 2 mm. Prietaiso konstrukcija leidžia tirti rageną centrinėje zonoje ir jos paracentrinėse srityse.

Kontraindikacijos procedūrai

Santykinė kontraindikacija yra stiprus akių dirginimas dėl ūminio uždegiminio proceso.

[ 10 ], [ 11 ]

Normalus našumas

Normalus ragenos morfologinis vaizdas

Priekinį epitelį sudaro 5–6 ląstelių sluoksniai. Vidutinis viso epitelio storis yra apie 50 µm. Pagal morfologinę struktūrą (iš vidaus į išorę) skiriami šie sluoksniai: baziniai, ylos formos ląstelių ir paviršiniai.

• Vidinį (bazalinį) sluoksnį sudaro mažos, tankios, cilindrinės ląstelės be matomo branduolio. Bazalinių ląstelių ribos yra aiškios ir ryškios.
• Vidurinį sluoksnį sudaro 2–3 dygliuotų (sparnuotų) ląstelių sluoksniai su giliomis invaginacijomis, į kurias įaugusios kaimyninių ląstelių ataugos. Mikroskopiškai ląstelių ribos yra gana aiškiai atskiriamos, o branduoliai gali būti neapibrėžti arba neaiškūs.
• Paviršinį epitelio sluoksnį sudaro vienas arba du daugiakampių ląstelių sluoksniai su aiškiomis ribomis ir homogenišku tankiu. Branduoliai paprastai yra ryškesni nei citoplazma, kurioje taip pat galima išskirti perinuklearinį tamsų žiedą.

Tarp paviršinio sluoksnio ląstelių išskiriamos tamsiosios ir šviesiosios ląstelės. Padidėjęs epitelio ląstelių atspindumas rodo jų medžiagų apykaitos greičio sumažėjimą ir prasidėjusį pleiskanojimą.

Bowmano membrana yra skaidri struktūra, neatspindinti šviesos, todėl jos paprastai neįmanoma vizualizuoti konfokaline mikroskopija.

Subbazalinis nervų rezginys yra po Bowmano membrana. Normaliomis sąlygomis nervinės skaidulos atrodo kaip ryškios, lygiagrečios juostelės tamsiame fone, besiliečiančios viena su kita. Atspindumas (atspindumas) gali būti netolygus išilgai skaidulos.

Ragenos stroma užima 80–90 % ragenos storio ir susideda iš ląstelinių ir tarpląstelinių komponentų. Pagrindiniai stromos ląsteliniai elementai yra keratocitai; jie sudaro maždaug 5 % ragenos tūrio.

Tipiškame mikroskopiniame stromos paveikslėlyje matomi keli ryškūs netaisyklingos ovalo formos kūneliai (keratocitų branduoliai), esantys skaidrios, tamsiai pilkos arba juodos matricos storyje. Paprastai tarpląstelinių struktūrų vizualizuoti neįmanoma dėl jų skaidrumo. Stromą galima sąlygiškai suskirstyti į posluoksnius: priekinį (esantį tiesiai po Bowmano membrana ir sudarantį 10 % stromos storio), priekinį-vidurinį, vidurinį ir užpakalinį.

Vidutinis keratocitų tankis didesnis priekinėje stromoje, palaipsniui mažėjantis link užpakalinių sluoksnių. Priekinių stromos ląstelių tankis yra beveik dvigubai didesnis nei užpakalinių stromos ląstelių (jei priekinės stromos ląstelių tankis imamas kaip 100 %, tai užpakalinių stromos ląstelių tankis bus apie 53,7 %). Priekinėje stromoje keratocitų branduoliai yra apvalios pupelės formos, o užpakalinėje stromoje jie yra ovalūs ir labiau pailgi.

Keratocitų branduoliai gali skirtis savo ryškumu. Skirtingas gebėjimas atspindėti šviesą priklauso nuo jų metabolinės būsenos. Ryškesnės ląstelės laikomos aktyvuotais keratocitais („streso“ ląstelėmis), kurių veikla skirta palaikyti ragenos vidinę homeostazę. Normaliame ir regėjimo lauke randamos pavienės aktyvuotos ląstelės.

Nervų skaidulos priekinėje ragenos stromoje vizualizuojamos kaip ryškios homogeninės juostos, dažnai sudarančios bifurkacijas.

Descemeto membrana paprastai yra skaidri ir nėra vizualizuojama konfokalinės mikroskopijos būdu.

Užpakalinis epitelis yra šešiakampių arba daugiakampių plokščių ląstelių monosluoksnis su tolygiai šviesiu paviršiumi aiškių tamsių tarpląstelinių ribų fone.

Įrenginys turi galimybę rankiniu arba automatiniu būdu apskaičiuoti ląstelių tankį, jų plotą ir kintamumo koeficientą.

Patologiniai ragenos struktūros pokyčiai

Keratokonusui būdingi reikšmingi ragenos priekinio epitelio ir stromos pokyčiai.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]